| تعداد نشریات | 286 |
| تعداد نشریات سازمان | 84 |
| تعداد شماره‌ها | 2,846 |
| تعداد مقالات | 32,300 |
| تعداد مشاهده مقاله | 41,387,058 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 18,562,163 |
همسانهسازی و تعیین خصوصیات ژن دلتا سیکس دسچوراز (d6d)، از گیاه گل گاوزبان ایرانی (Echium amoenum) | ||
| تحقیقات ژنتیک و اصلاح گیاهان مرتعی و جنگلی ایران | ||
| مقاله 1، دوره 19، شماره 2، اسفند 1390، صفحه 205-217 اصل مقاله (871.5 K) | ||
| نوع مقاله: مقاله علمی - پژوهشی | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.22092/ijrfpbgr.2012.6665 | ||
| نویسندگان | ||
| احسان شکری* ؛ سیّد کمال کاظمی تبار؛ جعفر ذوالعلی؛ قربانعلی نعمت زاده؛ نورالدین حسین پور آزاد؛ نجمه نصیری | ||
| چکیده | ||
| فعالیت آنزیم دلتا-6- دسچوراز (d6d) در تعداد معدودی از میکروارگانیزم‌ها و گیاهان از جمله گونه‌های جنس Echium متعلق به تیره گل گاوزبان (Boraginaceae) دیده میشود. این آنزیم اسیدلینولئیک و اسید آلفالینولنیک را به‌ترتیب به اسید گامالینولنیک و اسید استئاریدونیک تبدیل می‌نماید. جداسازی ژن کدکننده آنزیم مزبور و استفاده از آن در مهندسی مسیر بیوسنتز اسیدهای چرب در گیاهان زراعی، اطلاعات علمی و کاربردی ارزشمندی را بدست خواهد داد. در این تحقیق، با هدف جداسازی و همسانهسازی ژن d6d از گیاه گل گاوزبان ایرانی (E. amoenum)، پس از استخراج RNA کل و ساخت cDNA از بذرهای نارس گیاه، قطعه کدکننده ژن با استفاده از آغازگرهای طراحی شده بر اساس توالی آنزیم متناظر در گونه‌های خویشاوند، تکثیر گردید. قطعه تکثیر شده به طول تقریبی bp 1350 در پلاسمید ناقل همسانهسازی pBluescript SK(+) درج گردیده و پلاسمید نوترکیب به باکتری E. coli سویه DH5α منتقل شد. نتایج تعیین توالی نوکلئوتید، صحت همسانهسازی قطعه مورد نظر را تأیید نمود. توالی کدکننده آنزیم دلتا-6- دسچوراز در گل گاوزبان ایرانی مشتمل بر 1347 نوکلئوتید کدکننده 448 آمینواسید توصیف گردید. این توالی در سطح پروتئین از مشابهت 96 – 94 درصد با توالی آنزیم متناظر در سایر گونه‌های جنس Echium برخوردار بود. دمینهای مورد انتظار سیتوکروم b5، دسچوراز اسید چرب، موتیف‌های حفاظت شده غنی از هیستیدین و موتیف HPGG همگی در توالی پروتئین ترجمه شده شناسایی شدند. همچنین ساختار ثانویه، مناطق ترانس‌ممبران و الگوی هیدروپسی توالی پروتئین ترجمه شده تعیین گردید که از مطابقت بسیار بالایی با گزارش‌های متناظر از گونه‌های خویشاوند برخوردار بود. بررسی خصوصیات عملکردی آنزیم کد‌‌شونده توسط ژن d6d کلن شده، مستلزم بیان در سیستم گیاهی مناسب و بررسی کارکرد آن در سطوح بیوشیمیایی و آنزیمی می‌باشد. توالی کدکننده ژن دلتا-6- دسچوراز گیاه E. amoenum در پایگاه NCBI با شماره دسترسی GU237486 ثبت گردید. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| آنزیم دلتا سیکس دسچوراز؛ گامالینولنیک اسید؛ استئاریدونیک اسید؛ همسانهسازی؛ اسیدهای چرب غیراشباع | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| Cloning and characterization of full length CDS of delta-6 desaturase (d6d) from Iranian borage (Echium amoenum) | ||
| نویسندگان [English] | ||
| ehsan shokri؛ seyed kamal kazemi tabar؛ jafar zolala؛ ghorbanali nematzadeh؛ nooraldin hosseinpoor azad؛ najmeh nasiri | ||
| چکیده [English] | ||
| Delta-6 desaturase (D6D), an enzyme of a lipid methabolic pathway, has been found as active form in some microorganisms and plants like different species of the genus Echium from family Boraginaceae. The enzyme converts essential fatty acids linoleic acid and α-linolenic acid into long-chain polyunsaturated ones, γ-linolenic acid and stearidonic acid, respectively. In this research, to isolate the d6d gene from Iranian borage (Echium amoenum), we followed total RNA isolation from immature seeds, total cDNA synthesis and PCR amplification using the gene specific primers designed according to the sequence of d6d in the other Echium species. Approximately a 1350 bp amplified fragment was inserted into the vector pBluscript SK(+) and cloned in Escherichia coli strain DH5α. Nucleic acid sequence analysis of the cloned fragment verified the successful isolation and cloning of the full length CDS of d6d gene from E. amoenum. The cloned CDS include 1347 nucleotides coding for 448 amino acids. The translated protein possessed high similarity of 94–96% to its counterparts previously reported in other Echium species. All the expected domains, i.e., cytochrome b5, fatty acid desaturase, HPGG motif and histidine rich conserved motifs were found in the sequence of translated protein. Furthermore, secondary structure, transmembrane domains and the hydropathy profile of the protein were highly similar to its counterparts in the other Echium species. The d6d gene is a promising gene to engineer the fatty acid metabolism in crop plants. Gene expression studies are necessary for further characterization of the cloned gene and its encoded enzyme. The sequence of the coding region of d6d gene from E. amoenum was submitted to GenBank under the accession number GU237486. | ||
| کلیدواژه‌ها [English] | ||
| Delta-6 desaturase, Cloning, Echium amoenum, γ-linolenic acid, Stearidonic acid, Unsaturated Fatty Acids | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 6,745 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 1,042 |
||