1فارغالتحصیل کارشناسیارشد، دانشکده علوم و فنون دریایی، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران
2استادیار، دانشکده علوم و فنون دریایی، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران
3دانشجوی دکتری بیوتکنولوژی، دانشگاه USM پینانگ، مالزی
4کارشناسی ارشد، گروه ایمنولوژی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه شهید بهشتی، تهران
5استادیار، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه شهید بهشتی، تهران
6استاد، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه شهید بهشتی، تهران
چکیده
استفاده از گیاهان آبزی به واسطه داشتن ترکیبهای مختلف در پیشگیری و درمان بیماریها از حدود 3000 سال پیش در چین رایج بوده است. جلبک سبز دونالیلا (Dunaliella salina) نیز یکی از میکروجلبکهای اکوسیستمهای دریایی است که بهواسطه داشتن ترکیبهایی نظیر کاروتنوئیدها مخصوصاً بتا-کاروتن، رتینال، آپوکاروتنوئیدها، کتونها، آلدهیدها و اپوکسیدها که با ساختار شیمیایی خاص و روشهای بیوشیمیایی میتوانند اکسیژن تکی را دفع کنند و جاذب رادیکالها باشند. در مطالعات زیادی خاصیت ضدسرطانی و ضداکسیدانی این ترکیبها ثابت شده است. در این مطالعه از سلولهای سرطان پوست استفاده شد. ویژگی بارز این نوع سرطان پوست وجود سلولهای گسترشیافته پهن و فلسمانند است. هدف از این مطالعه بررسی اثر کشندگی عصاره اتانولی جلبک دونالیلا جدا شده از دریاچه حوض سلطان بر روی میزان مرگ و میر رده سلولی سرطان پوست با استفاده از نمک تترازولیوم در شرایط آزمایشگاهی بود. برای این منظور دونالیلا سالینا از دریاچه حوض سلطان در شمال شرقی قم برداشت، شناسایی و خالصسازی گردید. جلبک در محیط کشت جانسون کشت داده شد. توده جلبکی پس از برداشت و شستشو با بافر نمکی فسفات (Phosphate Buffered Salts (PBS)) در برودت خشک و برای تهیه عصاره اتانولی آماده شد. رده سلولی A431 از انستیتو پاستور تهیه و در محیط کشت RPMI (Royal Park Memorial Institute) حاوی سرم جنینی گاوی10% کشت داده شد. سلولها در حضور غلظتهای مختلف 0، 25/6، 5/12، 25، 50، 100 میکروگرم در میلیلیتر از عصاره در فواصل زمانی 6، 24، 48 ساعت در انکوباتور با دیاکسیدکربن 5% قرار داده شد. نتایج آماری دادهها نشان داد که بین غلظتهای مختلف عصاره در زمانهای 24 و 48 ساعت از نظر مرگ و میر سلولهای سرطانی اختلاف معنیداری وجود دارد (05/0P<)، ولی در زمان 6 ساعت سطح معنیداری مشاهده نشد (05/0P<). LC50 عصاره در غلظتهای مختلف بر روی رده سلولی سرطان پوست در فواصل زمانی گرمخانهگذاری 6، 24، 48 ساعت ارزیابی شد. نتیجه LC50 پس از گذشت زمان 48 ساعت 6/46 میکروگرم در میلیلیتر بدست آمد. عصاره اتانولی جلبک دونالیلا جهت سنجش میزان بتا-کاروتن موجود در آن توسط HPLC آنالیز شد. نتایج بدست آمده از این مطالعه، اثر کشندگی عصاره اتانولی جلبک دونالیلا سالینا را بر روی رده سلولی A431 نشان میدهد. بهطوری که با افزایش غلظت عصاره و افزایش انکوباسیون مرگ و میر سلولهای سرطان پوست نیز افزایش مییابد. پس دونالیلا میتواند بهعنوان یک عامل شیمیایی و جلوگیرنده قوی رشد برای این رده سلولی مطرح باشد.
Aquatic plants have been used prevalently in China since 3000 years ago due to having various chemical compounds for diseases prevention and cure. Dunaliella salina is one of the micro algae in marine ecosystems containing beta-carotene, retinal, apocarotenoides, ketones, aldehydes and epoxides which enable it to absorb free radicals and produce singlet oxygen. In many studies, the anti-cancer and anti-oxidant effects of these chemical compounds have been confirmed. In this study, squamous cell skin cancer was used. The main goal of this research was to study the killing effects of the ethanol extract from the mentioned alga against Squamous cell carcinoma in vitro through using tetrazolium salt under in vitro conditions. Dunaliella Salina was collected from Hoz-Soltan Salt Lake located in the northeast of Qom. Algae were cultured on Johnson Medium. Algae mass were purified with PBS and then freeze dried. A431 cell line obtained from Pasteur Institution was cultured in RPMI medium containing FBS 10%. Cells were incubated with 5% CO2 in presence of different concentrations 0, 6.25, 12.5, 25, 50 and 100 μg/ml of extracts in time periods of 6, 24, and 48 hours. Results of the statistical analysis showed that there was a significant difference among various extract concentrations on death cells in 24 h and 48 h incubation (P < 0.05). Lc50 of different concentrations of extract against skin carcinoma cell line were evaluated in incubation period of 6, 24, and 48 hours. Lc50 results after 48 hours showed value of 46.6 6 μg/ml. The ethanol extract of Dunaliella algae was analyzed by HPLC in order to evaluate the available beta carotene in algae. Our results confirm the killing effect of ethanol extract of Dunaliella against line Squamous cell carcinoma. With increasing extract concentration and incubation time, death of cells on the skin cancer cell line increased. Therefore, Dunaliella can be considered as a strong chemopreventive agent and anti cancer against this cell line.