2استادیار، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و بیوتکنولوژی
3دانشیار، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی، مشهد
4دانشجوی دکتری بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی، مشهد
چکیده
امروزه گیاه Papaver somniferom L. بهعنوان منبع تجاری آلکالوئیدهای ارزشمند مورفین و کدئین محسوب میشود. آنزیم کدئینون ردوکتاز (Codeinonereductase) با قابلیت تبدیل کدئینون به کدئین و مورفینون به مورفین از آنزیمهای کلیدی جهت مهندسی متابولیک مسیر بیوسنتز این ترکیبها محسوب میشود. در این تحقیق ابتدا بهینهسازی انتقال ژن از طریق Agrobacterium tumefaciens دارای پلاسمید pBI121 (حاوی ژن گزارشگر gus) انجام گردید. جداسازی ژن مربوط به بیوسنتز کدئینون ردوکتاز براساس توالی موجود در بانک اطلاعاتی (NCBI) انجام و در ناقل بیانی تحت کنترل پروموتر CaMV35S کلون گردید. پس از آمادهشدن سازه، ریزنمونههای هیپوکوتیلی شقایق توسط آگروباکتریوم حامل سازه نوترکیب، تلقیح شده و با استفاده از روش مولکولی PCR و آغازگرهای اختصاصی پیشرو ژن cor و برگشتی ژن nos الحاق ژن در ژنوم گیاهان تأیید گردید. آنالیز HPLC نشاندهنده تغییر میزان، نوع و درصد ترکیبهای آلکالوئیدی در نمونههای تراریخته نسبت به گیاهان شاهد بود. نتایج تحقیق حاضر نشاندهنده اهمیت دستورزی ژنتیکی آنزیمهای مسیر بیوسنتزی مورفین در تغییر الگوی تولید متابولیتهای ارزشمند بنزیلایزوکوئینولین میباشد.
Stable Over expression of codeinone reductase gene in transgenic
Papaver somniferum L.
نویسندگان [English]
B. Hosseini1؛ H. Hashemi Sohi2؛ F. Shahriari3؛ E. Dehghan4
1Urmieh University, Urmieh, Iran
2National Research Institute of Genetic Engineering and Biothechnology, Tehran, Iran
3Faculty of Agriculture, Ferdowsi Univesity, Mashhad, Iran
4PhD. student, Faculty of Agriculture, Ferdowsi Univesity, Mashhad, Iran
چکیده [English]
Papaver somniferum L. today is considered as the commercial source of the narcotic analgesics morphine and codeine. Codeinone reductase is a key gene in metabolic engineering of isoquinoline alkaloids pathway with the ability of conversion of codeinone to codein and morphine. In this project, at first optimization of the gene transfer of P. somniferum was performed via A. tumefascience containing pBI121 plasmid. This gene then was cloned in expression vectors under control of CaMV35 promoter and transferred to plants by agro transformation. After preparing the structure, hypocotyl explants of P. somniferum was inoculated by agrobacterium carrying recombinant structures. HPLC analysis indicated the variation of the amount, type and percentage of alkaloid compounds in transgenic samples compared to the control plants. The result of the evaluation showed qualitative and quantitative changes in metabolite production of transgenic and control plants.