1Cellular and Molecular Research Center, Ahvaz Jundishapur University of Medical Sciences, Ahvaz, Iran
2Department of Pathobiology, Faculty of Veterinary Medicine, Bu-Ali Sina University, Hamedan, Iran
3Department of Parasitology, Faculty of Medicine, Ahvaz Jundishapur University of Medical Sciences, Ahvaz, Iran
چکیده
Background: Cutaneous leishmaniasis is a common form of leishmaniasis caused by infection with the Leishmania major parasite in the world and in Iran. The lack of an effective vaccine and drug resistance prompted this study to investigate the invasive mechanisms caused by the live attenuated strain of Leishmania major parasite in BALB/c mice. Materials and Methods: Leishmania promastigotes which have been attenuated after one, four, nine and twenty passages in a special culture medium were injected into the tail base of 6-8w BALB/c mice. The size of the wound was measured, the phagocytosis ability of macrophages in the peritoneal cavity was evaluated by NBT(Nitroblue Tetrazolium Test), the proliferation of splenocytes was measured by the MTT([3-(4,5-dimethylthiazol-2- yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide] test, and histopathologic changes of skin, spleen, lymph nodes and liver were examined at day 15, 30, and 45 after inoculation. Results: The severity of tissue damage to the skin, spleen, and liver was higher at passages 1, 4 and 9 of live attenuated parasite on days 15 and 30 and increased at passage 1 of parasite on day 45. However, the intensity of the cellular response was lower at passage 20 of attenuated parasite, the size of the wound showed a significant decrease and a relative increase in phagocytosis on day 30 of the infection period; despite the infiltration of mononuclear cells and macrophages in all organs, parasites were only visible in the skin on day 45, and no Leishmania parasites were observed in the lymph nodes, spleen and liver tissue. Conclusions The results of histopathologic changes, phagocytosis and proliferation of splenocytes showed that as the virulence of the Leishmania major parasite were decreased, the invasive potency of the parasite also decreased, which will be useful as initial findings for the study to develop a live attenuated vaccine.
تغییرات سلولی و هیستوپاتولوژیک در موش BALB/c آلوده به انگل زنده تخفیف حدت یافته لیشمانیا ماژور
چکیده [English]
سابقه و هدف: لیشمانیوز جلدی فرم شایع بیماری لیشمانیوزناشی از انگل لیشمانیا ماژور در جهان و ایران است. عدم وجود واکسن مناسب و مقاومتهای دارویی موجب طراحی مطالعه حاضر به منظور بررسی مکانیسم های تهاجمی ایجاد شده توسط سویه زنده تخفیف حدت یافته انگل لیشمانیا ماژور در موش بالب سی شده است. مواد و روشها: پروماستیگوتهای لیشمانیا که پس از پاساژهای 1، 4، 9 و 20 در محیط کشت اختصاصی تضعیف شده، به صورت داخل جلدی به قاعده دم موشهای BALB/c 6-8w تزریق شد. سایز زخم اندازه گیری شده و قدرت فاگوسیتوزماکروفاژهای حفره صفاقی با روش NBT (Nitroblue Tetrazolium Test) ارزیابی شد، تکثیر سلولهای طحالی با MTT ([3-(4,5-dimethylthiazol-2- yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide] سنجش شده و تغییرات هیستوپاتولوژیک پوست، طحال، غدد لنفاوی و کبد در روزهای 15، 30 و 45 پس از تلقیح بررسی شد. نتایج: شدت آسیب بافتی به پوست، طحال و کبد در پاساژهای 1، 4 و 9 از انگل زنده تضعیف شده، در روزهای 15 و 30 بیشتر از پاساژ 20 انگل ضعیف شده بود و در پاساژ 1 انگل در روز 45 افزایش یافت. با این حال، در تلقیح انگل پاساژ 20، شدت پاسخ سلولی و التهاب کمتر بود، اندازه زخم کاهش قابل توجهی را داشت و افزایش نسبی فاگوسیتوز در روز 30 دوره عفونت نشان داده شد. علیرغم نفوذ سلول های تک هسته ای و ماکروفاژها در همه اندام ها، انگل تنها در روز 45 در پوست قابل مشاهده بود و انگل لیشمانیا در غدد لنفاوی، طحال و بافت کبد مشاهده نشد. نتیجه گیری: تغییرات هیستوپاتولوژیک، فاگوسیتوز و تکثیر سلولهای طحالی نشان داد که با کاهش ویرولانس انگل، قدرت تهاجمی انگل کاهش یافته و می تواند به عنوان یافته های پایه جهت طراحی یک واکسن زنده تخفیف حدت یافته مفید باشد.