| تعداد نشریات | 286 |
| تعداد نشریات سازمان | 84 |
| تعداد شماره‌ها | 2,846 |
| تعداد مقالات | 32,300 |
| تعداد مشاهده مقاله | 41,387,191 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 18,562,197 |
Development of a Novel Indirect ELISA Assay for the Detection of SARS-CoV-2 IgG antibodies using a Highly sensitive RBD-Nucleoprotein Fusion Antigen | ||
| Archives of Razi Institute | ||
| مقالات آماده انتشار، پذیرفته شده، انتشار آنلاین از تاریخ 21 آبان 1403 | ||
| نوع مقاله: Original Articles | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.22092/ari.2024.365446.3084 | ||
| نویسندگان | ||
| Sohrab - Sam1؛ Behrokh - Farahmand2؛ Hamideh Ofoghi* 3 | ||
| 1Department of Biotechnology. Iranian research organization for science and technology (IROST). Tehran-Iran. | ||
| 2Department of Influenza and Other Respiratory Viruses. Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. | ||
| 3Department of Biotechnology, Iranian Research Organization for Science and Technology (IROST), Tehran, Iran. | ||
| چکیده | ||
| Abstract Background: The early and accurate diagnosis of COVID-19 is essential for efficient disease management. Traditionally, Enzyme-Linked Immunosorbent Assays for detecting IgG antibodies to SARS-CoV-2 have relied on single antigens, such as the Spike or Nucleoprotein. However, the test sensitivity has not been satisfactory. This study diverges from conventional approaches by developing an indirect ELISA assay utilizing a novel highly-sensitive fusion antigen incorporating both the Receptor-Binding Domain (RBD) and Nucleoprotein (N). The physicochemical characteristics of this unique antigen were examined and confirmed through experimental validation in our recent research. Our primary objective is to augment the diagnostic sensitivity and accuracy of the ELISA assay. Materials and Method: The indirect ELISA assay was developed using a novel fusion antigen incorporating both the Receptor-Binding Domain (RBD) and Nucleoprotein (N) of SARS-CoV-2. Subsequently, A cohort of 112 patients presenting with COVID-19 symptoms was evaluated to detect SARS-CoV-2 RNA. Additionally, 25 serum samples from pre-pandemic healthy individuals were selected as the negative control group. The study was conducted in Tehran province, Iran, from Murch to July 2022. Serum samples from patients who tested positive using the real-time PCR method were collected, and an in-house indirect ELISA assay was developed. The sensitivity and specificity of the assay were evaluated and compared with the commercial Euroimmun anti-SARS-CoV-2 IgG assay results, which served as the gold standard. The ROC curve was analyzed using GraphPad Prism to assess the accuracy and reliability of the in-house ELISA assay. Results: The in-house ELISA assay developed in this study demonstrated successful performance and showed 100% sensitivity and 96% specificity in detecting anti-SARS-CoV-2 IgG antibodies. Receiver operating characteristic (ROC) analysis yielded an area under the curve (AUC) of 0.976, indicating high accuracy. Conclusions: Our in-house ELISA assay exhibits high sensitivity and specificity, highlighting its suitability for commercial development as a reliable diagnostic kit for detecting COVID-19 cases. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| COVID-19؛ ELISA Assay؛ Nucleoprotein؛ Receptor Binding Domain (RBD)؛ SARS-CoV-2 | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| توسعه یک روش الایزای غیر مستقیم جدید بمنظور شناسایی آنتی بادی های IgG کروناویروس SARS-CoV-2 با استفاده از فیوژن آنتی ژن RBD-Nucleoprotein دارای حساسیت بالا | ||
| چکیده [English] | ||
| زمینه و هدف: تشخیص زودهنگام و دقیق COVID-19 برای مدیریت موثر بیماری ضروری است. به طور مرسوم ، سنجش‌های الایزا برای تشخیص آنتی‌بادی‌های IgG مربوط به SARS-CoV-2 بر روی آنتی‌ژن‌های منفرد مانند Spike یا Nucleoprotein تکیه می‌کردند. با این حال، حساسیت تست رضایت بخش نبوده است. این مطالعه با توسعه یک روش ELISA غیرمستقیم با استفاده از یک آنتی ژن فیوژن بسیار حساس جدید که هر دو دومن اتصال گیرنده (RBD) و نوکلئوپروتئین (N) را در خود جای داده است، از رویکردهای مرسوم فاصله می‌گیرد. ویژگی های فیزیکوشیمیایی این آنتی ژن منحصر به فرد از طریق اعتبار سنجی تجربی و عملی در تحقیقات اخیر ما مورد بررسی و تایید قرار گرفت. در این مطالعه هدف اصلی ما افزایش حساسیت تشخیصی و دقت در سنجش الایزا است. مواد و روش ها: سنجش الایزای غیرمستقیم با استفاده از یک آنتی ژن فیوژن جدید که هر دو دامنه اتصال گیرنده (RBD) و نوکلئوپروتئین (N) SARS-CoV-2 را در خود جای داده است، توسعه یافت. گروهی از 112 بیمار با علائم COVID-19 برای تشخیص RNA SARS-CoV-2 مورد ارزیابی قرار گرفتند. علاوه بر این، 25 نمونه سرم از افراد سالم به عنوان گروه کنترل منفی انتخاب شدند. این مطالعه در منطقه استان تهران ، از بهمن تا تیرماه 1400 انجام شد. نمونه‌های سرمی از بیمارانی که با استفاده از روش Real-time PCR مثبت بودند، جمع‌آوری شد و یک روش الایزای غیرمستقیم داخلی طراحی شد. حساسیت و ویژگی مربوط به این سنجش الایزا مورد ارزیابی قرار گرفت و با نتایج کیت تجاری Euroimmun anti-SARS-CoV-2 IgG، که به عنوان استاندارد طلایی عمل می‌کرد، مقایسه شد. منحنی ROC با استفاده از GraphPad Prism برای ارزیابی دقت و قابلیت اطمینان سنجش ELISA داخلی تجزیه و تحلیل شد. یافته‌ها: سنجش ELISA داخلی توسعه‌یافته در این مطالعه عملکرد موفقیت‌آمیزی را نشان داد و 100 درصد حساسیت و ویژگی 96 درصد را در تشخیص آنتی‌بادی‌های IgG ضد SARS-CoV-2 نشان داد. تجزیه و تحلیل مشخصه عملکرد گیرنده (ROC) ناحیه زیر منحنی (AUC) 0.976 را به دست آورد که نشان دهنده دقت بالا است. نتیجه‌گیری: سنجش ELISA داخلی ما حساسیت و ویژگی بالایی را نشان می‌دهد و مناسب بودن آن را برای توسعه تجاری به عنوان یک کیت تشخیصی قابل اعتماد برای تشخیص موارد COVID-19 برجسته می‌کند. | ||
| کلیدواژه‌ها [English] | ||
| COVID-19, آزمون الایزا, حساسیت آزمون الایزا, اختصاصیت آزمون الایزا, پروتئین فیوژن, نوکلئوپروتئین, دومن متص شونده به گیرنده (RBD), ویروس SARS-COV-2 | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 67 |
||