1دانش آموخته کارشناس ارشد علوم دامی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد قائمشهر
2بخش تحقیقات زنبورعسل، موسسه تحقیقات علوم دامی کشور، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایران
3دانشیار گروه گیاهپزشکی، بخش حشره شناسی دانشکده کشاورزی، دانشکدگان کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه تهران، کرج، ایران
4گروه ژنتیک، اصلاح و فیزیولوژی دام و طیور، دانشکده علوم دامی، دانشگاه علوم کشاورزی ومنابع طبیعی گرگان، گرگان، ایران
چکیده
امروزه استفاده از پروبیوتیکها در تغذیه انسان، دام و طیور بطور قابل ملاحظهایی در حال افزایش است پروبیوتیکها میتوانند نقش مهمی در سیستم ایمنی، دستگاه گوارش، دستگاه تنفسی، وظایف و اثر قابل توجهی در کاهش بیماریهای عفونی بدن ایفا نمایند.شایعترین انواع میکروبهای مورد استفاده به عنوان پروبیوتیک، باکتریهای لاکتیک اسید و بیفیدوباکتریها می-باشند.از عسل و فرآوردههای زنبور عسل قرنهاست که به منظور شفا و درمان بیماریها استفاده میشود.متأسفانه اطلاعات در مورد باکتریهای پروبیوتیکی موجود در زنبور عسل در حال حاضر اندک است.هدف از این تحقیق جداسازی و شناسایی لاکتوباسیلوسهای موجود در عسل معده زنبورعسل کوچک بعنوان منبع جدید پروبیوتیکها در ایران بوده است. نمونههای زنبورعسل (Apis florea) از مناطق جنوبی ایران جمع آوری گردیدو تا زمان انجام آزمایش در یخچال نگهداری شدند، سپس کشت و جداسازی باکتریها با استفاده از محیط کشتهای اختصاصیMrs broth و Agar انجام گرفت.برای شناسایی باکتریها، تستهای بیوشیمیایی مانند آزمون کاتالاز و آزمون گرم انجام شد و آنهایی که از نظر آزمون کاتالاز، مثبت و از نظر آزمون گرم، منفی بودند حذف گردیدند.سپس DNA کلنیهای جدا شده استخراج شد.با استفاده از پرایمرهای اختصاصی، تعیین توالی نوکلئوتیدهای مورد بررسی قرار گرفت. پس از توالی سنجی وشناسایی آنها با بکار بردن نرم افزار ژنتیکی Blast، باکتریهای موجود در عسل شناسایی گردید.نتایج تحقیق نشان داد که 6 گونه از لاکتوباسیلها در عسل زنبورعسل کوچک وجود دارد و حدود 4/28 درصد از لاکتوباسیلها بعنوان گونه های جدید شناسایی گردیدند که میبایست اطلاعات آنها را در بانک ژن ثبت نمود. قالب لاکتوباسیل جدا شده در این تحقیق Lactobacillus kunkeei میباشد.
Isolation and identification of lactic acid producing bacteria from Flora honey bee in the southern regions of the country
نویسندگان [English]
Somayeh Tazehkam1؛ naser Tajabadi2؛ Jamasb Nozari3؛ Yoseph Jafari Ahangari4؛ Mohammad Hadi Mohseni Kafshgarkolaee1
1Master's degree in animal science, Islamic Azad University, Qaimshahr branch
2Department of Honey Bee, Animal Science Research Institute of Iran, Agricultural Research Education and Extension Organization, Karaj, Iran
3Associate Professor, Department of Botany, Department of Entomology, Faculty of Agriculture, College of Agriculture and Natural Resources, University of Tehran, Karaj, Iran
4Department of Genetics, Breeding and Physiology of Animal and Poultry, Faculty of Animal Sciences, Gorgan University of Agricultural Sciences and Natural Resources, Gorgan, Iran
چکیده [English]
Probiotic bacteria are becoming increasingly important in the content of human nutrition. Nowadays, probiotics are being increasingly promoted worldwide, with suggestions that probiotics can play an important role in immunological, digestive, and respiratory functions and could have a significant effect in alleviating infectious disease. Lactic acid bacteria and bifidobacteria are the most common types of microbes used as probiotics. Honey and bee products have been used in healing for centuries. Unfortunately, information about probiotics bacteria in local honeybee is not currently available and scant. Thus, the aim of this study was to isolate and identify the predominant Lactobacillus as probiotic from the honey stomach of Apis florea in the Iran. Samples of honeybee were collected from Apis florea colonies from Iran. Samples were preserved in fridge till test starts. Lactobacillus bacteria are isolated from honey stomach using MRS broth and agar medium. The isolates were Gram-stained and tested for Catalase reaction. Then DNA extracted of bacterial colonies amplified with PCR using lactobacilli primers. After sequencing, all bacterial gene identified by using Blast software.DNA from all lactobacillus in the honey were exhibited to be catalase negative, gram positive and the other with catalase positive and gram negative were eliminated.6 new strain/ species of Lactobacillus bacteria were identified from honey stomach in different colonies of A. florea and almost 28.4% of them identified as new species and candidate to register in NCBI.Most of them are Lactobacillus kunkeei. Lactobacillus in the honey stomach may have the potential to promote human performance and health.