Hamidi, Adel, Farzin, Hamidreza, Haghparast, Alireza. (1403). Design, synthesis and in vivo evaluation of a candidate fusion epitopic construct vaccine based on M2e, HA1, HA2, NA and NP fragments of the high pathogenic avian H5N1 influenza virus. سامانه مدیریت نشریات علمی, (), -. doi: 10.22092/ari.2024.365573.3104
Adel Hamidi; Hamidreza Farzin; Alireza Haghparast. "Design, synthesis and in vivo evaluation of a candidate fusion epitopic construct vaccine based on M2e, HA1, HA2, NA and NP fragments of the high pathogenic avian H5N1 influenza virus". سامانه مدیریت نشریات علمی, , , 1403, -. doi: 10.22092/ari.2024.365573.3104
Hamidi, Adel, Farzin, Hamidreza, Haghparast, Alireza. (1403). 'Design, synthesis and in vivo evaluation of a candidate fusion epitopic construct vaccine based on M2e, HA1, HA2, NA and NP fragments of the high pathogenic avian H5N1 influenza virus', سامانه مدیریت نشریات علمی, (), pp. -. doi: 10.22092/ari.2024.365573.3104
Hamidi, Adel, Farzin, Hamidreza, Haghparast, Alireza. Design, synthesis and in vivo evaluation of a candidate fusion epitopic construct vaccine based on M2e, HA1, HA2, NA and NP fragments of the high pathogenic avian H5N1 influenza virus. سامانه مدیریت نشریات علمی, 1403; (): -. doi: 10.22092/ari.2024.365573.3104
Design, synthesis and in vivo evaluation of a candidate fusion epitopic construct vaccine based on M2e, HA1, HA2, NA and NP fragments of the high pathogenic avian H5N1 influenza virus
1Biotechnology Section, Department of Pathobiology, Faculty of Veterinary Medicine, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran
2Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agriculture Research, Education and Extension Organization (AREEO), Mashhad, Iran
3Immunology Section, Department of Pathobiology, Faculty of Veterinary Medicine, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran.
چکیده
The H5N1 subtype of Influenza virus, have a very high pathogenicity and lethality in humans and animals, and the need to develop new vaccines with a wide range of effects against this pathogen seems to be very crucial. Today, a highly regarded solution to this problem is to design and produce recombinant vaccines using the conserved peptide of influenza viruses. By searching in international databases, the peptide sequence of M2e fragment of H5N1 viruses isolated from Iran and a variety of conserved peptide sequences of fragments of HA1, HA2, NA and NP of other H5N1 virus was obtained for both MHC receptors in mice. Then these fragments along with a PADRE sequence were connected by bioinformatics programs to design a fusion epitopic construct construct. Afterwards the designed construct was optimized for expression in E.coli BL21. After expression, and purifications of fusion epitopic construct, it was injected subcutaneously (SC) into the hindlimb muscles of 6 – 8 old week female BALB/c mice. Three weeks after the end of the second immunization, both groups of immunized and control mice were weighed and checked for any side effects at the injection sites. Eventually the mice were euthanized and blood was collected from their heart to determine the total IgG antibody before and after immunization by ELISA. No local inflammation or complications were observed at the SC injection sites until the end of the experiment and autopsy of mice showed no bleeding or lesions in organs especially liver and spleen. The weight of the mice did not change significantly during the immunization period. The total IgG level measured by average OD value in the serum of immunized mice showed five times more (5.881 ng/ml) compared to the control group (1.143 ng/ml). Our results demonstrated a highly significant IgG antibody response following SC administration of immunogenic recombinant peptide in mice.
طراحی، سنتز و ارزیابی in vivo یک کاندید واکسن ساختار اپیتوپی فیوژن بر اساس قطعات Na, HA2, HA1, M2e و NP ویروس آنفلوانزای پرندگان H5N1 با بیماری زا بالا
چکیده [English]
زیرگروه H5N1 ویروس آنفولانزا، بیماری زایی و کشندگی بسیار بالایی در انسان و حیوان دارد و نیاز به ساخت واکسن های جدید با طیف وسیعی از اثرات بر علیه این پاتوژن بسیار حیاتی به نظر می رسد. امروزه، یک راه حل بسیار مورد توجه برای این مشکل، طراحی و تولید واکسن های نوترکیب با استفاده از پپتید حفاظت شده ویروس های آنفلوانزا است. با جستجو در پایگاههای اطلاعاتی بینالمللی، توالی پپتیدی قطعه M2e ویروس H5N1 جدا شده از ایران و انواع توالیهای پپتیدی حفاظتشده قطعات HA1، HA2، NA و NP سایر ویروسهای H5N1 برای هر دو گیرنده MHC در موش به دست آمد. سپس این قطعات به همراه یک توالی PADRE توسط برنامه های بیوانفورماتیک برای طراحی یک ساختار اپیتوپی فیوژن متصل شدند. سپس سازه طراحی شده برای بیان در E.coli BL21 بهینه شد. پس از بیان، و خالص سازی ساختار اپیتوپی فیوژن، آن را به صورت زیر جلدی (SC) به عضلات اندام عقبی موش ماده BALB/c هفته 6-8 تزریق شد. سه هفته پس از پایان ایمن سازی دوم، هر دو گروه موش واکسینه شده و موش کنترل وزن شدند و از نظر عوارض جانبی در محل تزریق بررسی شدند. در نهایت موش ها معدوم شدند و خون از قلب آنها برای تعیین آنتی بادی IgG کل قبل و بعد از ایمن سازی با روش الایزا جمع آوری شد. هیچ التهاب موضعی یا عارضهای در محلهای تزریق SC تا پایان آزمایش مشاهده نشد و کالبد شکافی موشها هیچ خونریزی یا ضایعهای در اندامها بهویژه کبد و طحال نشان نداد. وزن موش ها در طول دوره ایمن سازی تغییر قابل توجهی نداشت. سطح کل IgG اندازهگیری شده با میانگین OD در سرم موشهای ایمنسازی شده، پنج برابر بیشتر (5.881 نانوگرم در میلیلیتر) در مقایسه با گروه کنترل (1.143 نانوگرم در میلیلیتر) نشان داد. نتایج ما پاسخ آنتی بادی IgG بسیار قابل توجهی را پس از تجویز SC پپتید نوترکیب ایمونوژنیک در موش نشان داد.