1Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran
2Department of Quality Control, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education, and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran.
3Department of Human Viral Vaccines, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran
چکیده
Viruses are obligate parasites and are completely dependent on host cells for survival and replication. RBK cell line developed and introduced by Razi Vaccine and Serum Research Institute, has been successfully established as a continuous cell line over successive passages. RBK cells demonstrate marked sensitivity to certain viruses. In this experimental study, RBK cell line has shown significant sensitivity to BoHV-1 virus. At present research, the characteristics of RBK cell line were performed by molecular and karyotype methods, as well as growth characteristics. Cloning of the RBK cell line was performed using limited dilution method in parallel with analytics for characterization of each cell clone quantitatively and qualitatively. Then four cell clones were compared based on their sensitivity to the BoHV-1 virus. Finally, the RBK-D5 clone was selected as the most appropriate cell line for further study and was subjected to tests for identity, chromosomal analysis and doubling time. In the end, RBKD5 in terms of species origin and contamination-free was confirmed by PCR method. We observed that the cell line directed towards karyotype diversity, because of aneuploidy. Aneuploidy itself can be responsible for the procreation of chromosomal instability. Karyotype diversity represent chromosomal changes in the continuous cell line that carries the characteristic of immortalized cell line. We found that the RBK-D5 was more sensitive to BOHV-1 virus. Surprisingly, its titer was evaluated CCID50/ml 108.5. These results suggested the RBK cell line can be suitable for the BoHV-1 virus; in addition, this cell line is useful for virus detection, propagation and quality control or viral titration.
تعیین ویژگی های رده سلولی RBK به عنوان یک سلول حساس به ویروس هرپس گاوی تیپ یک (BoHV-1)
چکیده [English]
ویروس ها انگل های اجباری هستند که برای بقا و تکثیر کاملاً به سلول های میزبان متکی هستند. رده سلولی RBK که توسط موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی تهیه و معرفی شده است، با موفقیت به عنوان یک رده سلولی پیوسته متعاقب پاساژ های متوالی ایجاد شده است. مطالعات تجربی نشان داده است، سلولهای RBK حساسیت مناسبی نسبت به ویروسهای خاص، از جمله ویروس BoHV-1 نشان می دهند. در تحقیق حاضر، ویژگیهای رده سلولی RBK با استفاده از روشهای مولکولی و کاریوتیپ و همچنین شاخصه های رشد مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. شبیه سازی رده سلولی RBK با استفاده از روش رقت گیری محدود انجام شد و هر کلون سلولی از نظر کمی و کیفی ارزیابی گردید. چهار کلون سلولی بر اساس حساسیت آنها به ویروس BoHV-1 مقایسه شد. سپس کلون RBK-D5 به عنوان مناسب ترین رده سلولی برای مطالعه بیشتر انتخاب شد. RBK-D5 تحت آزمایش های هویت، تجزیه و تحلیل کروموزومی و زمان دو برابر شدن قرار گرفت. در نهایت منشاء این رده سلولی با روش PCR تایید شد. مشاهده شد که رده سلولی مذکور به دلیل آنئوپلوئیدی، تنوع کاریوتیپ را نشان میدهد که میتواند مسئول تولید بیثباتی کروموزومی باشد. این تنوع نشان دهنده تغییرات کروموزومی در رده سلولی پیوسته است که ویژگی یک رده سلولی نامیراست. RBK-D5 به ویروس BOHV-1 حساس تر است. با کمال تعجب، تیتر آن CCID50/ml 108.5 ارزیابی شد. این نتایج نشان می دهد که رده سلولی RBK برای ویروس BoHV-1 مناسب است و می تواند برای تشخیص، تکثیر و یا تیتراسیون ویروس مفید باشد.