1گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد رشت، دانشگاه آزاد اسلامی، رشت، ایران
2دانشیار موسسه تحقیقات واکسن وسرم سازی رازی شعبه شمال شرق، بخش تحقیق و توسعه فرآوردههای بیولوژیک، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، مشهد، ایران
چکیده
لاکتوفرین دارای وزن مولکولی حدود 80 کیلودالتون و یک گلیکوپروتئین گلوبولار است. لاکتوفرین پس از جداسازی از شیر شتر، با استفاده از کروماتوگرافی تعویض یونی سی ام سفادکس سی 50 خالص گردید. با تزریق دو باکتری استافیلوکوکوس اورئوس و سودوموناس آئروژینوزا همراه با ادجوانتهای کیتوزان و آلوم به شتر، نانوبادی تهیه و با استفاده از آزمایش الایزا تولید آنتیبادی اختصاصی مورد تایید قرار گرفت. لاکتوفرین و نانوبادی با استفاده از روش تیامین پیروفسفات بر روی کیتوزان بارگذاری شدند. اثر توامان لاکتوفرین و نانوبادی بارگذاری شده بر روی کیتوزان علیه باکتریها با استفاده از آزمایش بررسی میزان رشد باکترها در حضور نمونه یاد شده و یا عدم حضور (کنترل) بررسی گردید. جهت بررسی آماری ابتدا با استفاده از نرم افزار گراف پد پریسم 9 آزمون آنالیز واریانس یک طرفه انجام و در صورت وجود اختلاف معنیدار 0.05>P به منظور تفکیک گروهها از آزمون توکی استفاده شد. براساس نتایج، بسته به غلظت لاکتوفرین و رقت نانوبادی میزان رشد استافیلوکوکوس اورئوس و سودوموناس آئروژینوزا در مقایسه با گروه کنترل به ترتیب 5/77-57 درصد و 5/71-5/53 درصد کاهش یافت. با توجه به نتایج میتوان بیان داشت که لاکتوفرین و نانوبادی بارگذاری شده بر روی کیتوزان بر روی باکتریهای گرم مثبت موثرتر از باکتریهای گرم منفی می باشند. با توجه به نتایج میتوان بیان نمود که لاکتوفرین و نانوبادی بارگذاری شده بر روی کیتوزان به عنوان یک ماده ضدباکتریایی میتوانند در انواع برنامههای تجاری برای کنترل رشد و بقای عوامل بیماریزا مفید باشند.
Combined effect of lactoferrin and nanobody loaded on chitosan against
Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa
نویسندگان [English]
Sh. Soleimani1؛ S. Zibaei2
چکیده [English]
Lactoferrin has a molecular weight of about 80 kDa and a globular glycoprotein. After isolation from camel milk, lactoferrin was purified using CM Sephadex C-50 ion exchange chromatography. By injecting two bacteria, Staphylococcus aureus and Pseudomonasaeruginosa, with chitosan and alum adjuvants to camel. Nanobodies were prepared and the production of specific antibodies was confirmed using ELISA. Lactoferrin and nanobody were loaded on chitosan using thiamine pyrophosphate method. The combined effect of lactoferrin and nanobody loaded on chitosan against bacteria was investigated using a bacterial growth test in the presence or absence (control) of the sample. For statistical analysis, first using Prism graph pad software 9 one-way analysis of variance was performed and if there was a significant difference of P <0.05, Tukey test was used to separate the groups. Based on the results, depending on the concentration of lactoferrin and nanobody dilution, the growth rate of Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa decreased by 57-77.5% and 51-53.5%, respectively, compared to the control group. It was stated that lactoferrin and nanobody loaded on chitosan are more effective on gram-positive bacteria than gram-negative bacteria. Based on the results, it can be stated that lactoferrin and nanobody loaded on chitosan as an anti-Bacteria can be useful in a variety of commercial programs to control the growth and survival of pathogens.