اخبار و اعلانات

 آمار

تعداد نشریات284
تعداد نشریات سازمان82
تعداد شماره‌ها2,784
تعداد مقالات31,679
تعداد مشاهده مقاله40,110,177
تعداد دریافت فایل اصل مقاله17,604,378
Bagheri, M, Zahmatkesh, A, Moharrami, M, Nematollahian, Sh, Torkaman, M. (1402). Diagnosis of Pebrine Disease in Silkworm Using Molecular Methods. سامانه مدیریت نشریات علمی, 78(4), 1185-1191. doi: 10.32592/ARI.2023.78.4.1185
M Bagheri; A Zahmatkesh; M Moharrami; Sh Nematollahian; M Torkaman. "Diagnosis of Pebrine Disease in Silkworm Using Molecular Methods". سامانه مدیریت نشریات علمی, 78, 4, 1402, 1185-1191. doi: 10.32592/ARI.2023.78.4.1185
Bagheri, M, Zahmatkesh, A, Moharrami, M, Nematollahian, Sh, Torkaman, M. (1402). 'Diagnosis of Pebrine Disease in Silkworm Using Molecular Methods', سامانه مدیریت نشریات علمی, 78(4), pp. 1185-1191. doi: 10.32592/ARI.2023.78.4.1185
Bagheri, M, Zahmatkesh, A, Moharrami, M, Nematollahian, Sh, Torkaman, M. Diagnosis of Pebrine Disease in Silkworm Using Molecular Methods. سامانه مدیریت نشریات علمی, 1402; 78(4): 1185-1191. doi: 10.32592/ARI.2023.78.4.1185

Diagnosis of Pebrine Disease in Silkworm Using Molecular Methods

Archives of Razi Institute
مقاله 4، دوره 78، شماره 4، مهر و آبان 2023، صفحه 1185-1191    اصل مقاله (421.34 K)
نوع مقاله: Original Articles
شناسه دیجیتال (DOI): 10.32592/ARI.2023.78.4.1185
نویسندگان
M Bagheri* 1؛ A Zahmatkesh1؛ M Moharrami1؛ Sh Nematollahian2؛ M Torkaman1
1Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran
2Iran Silkworm Research Center (ISRC) Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Rasht, Iran
چکیده
Since pebrine disease, as the most important and dangerous disease in silkworms, spreads horizontally through the spores and vertically through the eggs, combating the disease and eliminating it completely from livestock production has been associated with numerous problems. This project aimed to identify the molecular cause of pebrine disease in silkworms using a sensitive, specific, and accurate method. To this purpose, a 136 bp fragment was selected based on the Nosema bombycis partial SSU rDNA sequence, and a pair of primers was designed. Afterward, using the conventional polymerase chain reaction (PCR) method, the target fragment was amplified and sequenced. After that, to determine the detection sensitivity, using the Real-Time PCR method, 5-fold serial dilutions of N. bombycis DNA were prepared, and the last dilution that produced a fluorescent signal was considered the minimum detection limit. All tests were performed in duplicates. Based on the results of the sensitivity test, the standard curve including Ct values ​​and DNA concentration was used for analysis. Moreover, 80 unknown samples examined by light microscope were evaluated using conventional PCR and Real-Time PCR. Both PCR results showed no amplification for the negative control samples. The findings demonstrated that the lowest detection limit for N. bombycis was less than 6 pg of DNA, while, this amount was 8 ng for conventional PCR. Out of 80 samples examined, 55, 60, and 62 samples were positive for light microscope, conventional PCR, and Real-Time PCR methods, respectively. The findings suggested that the Real-Time PCR method had a higher ability to detect the causative agent of pebrine disease than the conventional PCR method, and both methods were superior to light microscopy. Therefore, due to the fewer steps and higher accuracy of Real-Time PCR, it can be introduced as a suitable method for diagnosing pebrine disease.
کلیدواژه‌ها
Silkworm؛ Pebrine disease؛ Nosema bombycis؛ Real-Time PCR method
عنوان مقاله [English]
تشخیص بیماری پبرین در کرم ابریشم با استفاده از روش های مولکولی
چکیده [English]
از آنجایی که بیماری پبرین به عنوان مهم ترین و خطرناک ترین بیماری کرم ابریشم به صورت افقی از طریق اسپور و به صورت عمودی از طریق تخم گسترش می یابد، مبارزه با این بیماری و حذف کامل آن از تولیدات دامی با مشکلات زیادی همراه بوده است. هدف از این پروژه شناسایی مولکولی عامل بیماری پبرین در کرم ابریشم با استفاده از روشی حساس، اختصاصی و دقیق بود. بنابراین، یک قطعه 136 جفت باز بر اساس توالی SSU rDNA نوزما بامبیسیس انتخاب و یک جفت پرایمر طراحی شد. سپس با استفاده از روش PCR معمولی قطعه هدف تکثیر و توالی یابی شد. پس از آن، برای تعیین حد تشخیص، با استفاده از روش Real-Time PCR، رقت‌های سریالی 5 برابری از DNA نوزما بامبیسیس. تهیه شد و آخرین رقت‌ که سیگنال فلورسنت تولید می‌کرد، به عنوان حداقل حد تشخیص در نظر گرفته شد. تمامی تست ها با دوتکرارانجام شد. بر اساس نتایج آزمون حساسیت، از منحنی استاندارد شامل مقادیر Ct و غلظت DNA برای آنالیز استفاده شد. همچنین 80 نمونه مشکوک که با میکروسکوپ نوری بررسی شده بودند، با استفاده از PCR معمولی و Real-Time PCR نیز مورد ارزیابی قرار گرفتند. هر دو روش PCR هیچ تکثیری را برای نمونه های کنترل منفی نشان ندادند. یافته ها نشان داد که کمترین حد تشخیص برای نوزما بامبیسیس کمتر از 6 pg DNA بود. در حالی که این مقدار برای PCR معمولی 8 نانوگرم بود. از 80 نمونه بررسی شده، 55، 60 و 62 نمونه به ترتیب برای روش های میکروسکوپ نوری، PCR معمولی و Real-Time PCR مثبت بودند. یافته ها حاکی از آن است که روش Real-Time PCR نسبت به روش PCR معمولی توانایی بالاتری در تشخیص عامل بیماری پبرین دارد و هر دو روش PCR نسبت به میکروسکوپ نوری برتری دارند. بنابراین با توجه به مراحل کمتر و دقت بالاتر Real-Time PCR می توان آن را به عنوان روشی مناسب برای تشخیص بیماری پبرین معرفی کرد.
کلیدواژه‌ها [English]
کرم ابریشم, بیماری پبرین, نوزما بامبیسیس, روش Real-Time PCR
سایر فایل های مرتبط با مقاله
مراجع
  1. Bhat I, Buhroo Z, Bhat M. Microsporidiosis in silkworms with particular reference to mulberry silkworm (Bombyx Mori L.). Int J Entomol Res. 2017;2(1):1-9.
  2. Abedi Parijani A, Motamed M, Kavusi Kalashmi M, editors. The role of silkworm breeding in job creation. Proceedings of Rural Development; 2015; Mashhad, Iran.
  3. Biabani M, Nematollahian S, editors. A review of the prevalence of Pebrine disease in different provinces in 2017 and its prevention and control methods in Iran Proceedings of the first national silk conference of Iran Rasht, Iran: University of Guilan;2017.
  4. Khezrian A, Bagheri M, Sourati Zanjani R, Kheirkhah Rahimabad Y, Nematollahian S, Zahmatkesh A. The effects of feed supplements and Nosema bombycis infection on economical traits in various silkworm breeding lines. Entomol Exp Appl. 2022;170(3):277-83.
  5. Rafeie F, Rezadoust MH, Abdoli R. New molecular diagnosis for pebrine inspection in silkworm eggs using a real-time PCR probe. Gene Rep. 2018;12:47-9.
  6. Sanders JL, Watral V, Clarkson K, Kent ML. Verification of intraovum transmission of a microsporidium of vertebrates: Pseudoloma neurophilia infecting the Zebrafish, Danio rerio. PLoS One. 2013;8(9):e76064.
  7. Chaimanee V, Pettis JS, Chen Y, Evans JD, Khongphinitbunjong K, Chantawannakul P. Susceptibility of four different honey bee species to Nosema ceranae. Vet Parasitol. 2013;193(1-3):260-5.
  8. Higuchi R, Fockler C, Dollinger G, Watson R. Kinetic PCR analysis: real-time monitoring of DNA amplification reactions. Biotechnology (N Y). 1993;11(9):1026-30.
  9. Fu Z, He X, Cai S, Liu H, He X, Li M, et al. Quantitative PCR for detection of Nosema bombycis in single silkworm eggs and newly hatched larvae. J Microbiol Methods. 2016;120:72-8.
  10. Kiani-Azad K, Bagheri M, Sadeghi M, Nematollahian S, Zahmatkesh A, Moharrami M, et al. Molecular Characterization of a New Nosema bombycis Strain Detected in Iranian Silkworm Farms. Acta Parasitol. 2022;67(3):1364-71.
  11. Moharrami M, Bagheri M, Nematollahian S. Detection and Characterization of Nosema bombycis Using TEM and SEM Techniques. Arch Razi Inst. 2022;77(4):1473-80.
  12. Sato R, Kobayashi M, Watanabe H, Fujiwara T. Serological discrimination of several kinds of microsporidian spores isolated from the silkworm, Bombyx mori, by an indirect fluorescent antibody technique. J Sericult Sci Jpn. 1981;50(3):180-4.
  1. Undeen AH, Cockburn AF. The extraction of DNA from microsporidia spores. J Invertebr Pathol. 1989;54(1):132-3.
  2. Bebitha B, Mohanraj P, s M, Mahalingam CA. Silkworm disease diagnosis through molecular approach and their management. Int J Plant Prot. 2016;9:343-52.
  3. Refardt D, Ebert D. Quantitative PCR to detect, discriminate and quantify intracellular parasites in their host: an example from three microsporidians in Daphnia. Parasitology. 2006;133(Pt 1):11-8.
  4. Liu J, Cheng W, Yan Y, Wei J, Yang J. Detection of pebrine disease in Bombyx mori eggs with the loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method based on EB1 gene. Acta Entomologica Sinica. 2015;58(8):846-55.
  5. Roy F, Mendoza L, Hiebert J, McNall RJ, Bankamp B, Connolly S, et al. Rapid Identification of Measles Virus Vaccine Genotype by Real-Time PCR. J Clin Microbiol. 2017;55(3):735-43.
  6. Bourgeois AL, Rinderer TE, Beaman LD, Danka RG. Genetic detection and quantification of Nosema apis and N. ceranae in the honey bee. J Invertebr Pathol. 2010;103(1):53-8.
19.          Polley SD, Boadi S, Watson J, Curry A, Chiodini PL. Detection and species identification of microsporidial infections using SYBR Green real-time PCR. J Med Microbiol. 2011;60(Pt 4):459-66. 

آمار
تعداد مشاهده مقاله: 288,723
تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 700


counter
سامانه مدیریت نشریات علمی. قدرت گرفته از سیناوب