اخبار و اعلانات

 آمار

تعداد نشریات283
تعداد نشریات سازمان81
تعداد شماره‌ها2,726
تعداد مقالات31,042
تعداد مشاهده مقاله28,017,680
تعداد دریافت فایل اصل مقاله16,244,684
Ziayaeifar, F, Soleimani, S. (1401). Evaluation of BHK-21 Cell Line for Specific Viruses by Two Different PCR Methods. سامانه مدیریت نشریات علمی, 77(5), 1631-1637. doi: 10.22092/ari.2021.356543.1867
F Ziayaeifar; S Soleimani. "Evaluation of BHK-21 Cell Line for Specific Viruses by Two Different PCR Methods". سامانه مدیریت نشریات علمی, 77, 5, 1401, 1631-1637. doi: 10.22092/ari.2021.356543.1867
Ziayaeifar, F, Soleimani, S. (1401). 'Evaluation of BHK-21 Cell Line for Specific Viruses by Two Different PCR Methods', سامانه مدیریت نشریات علمی, 77(5), pp. 1631-1637. doi: 10.22092/ari.2021.356543.1867
Ziayaeifar, F, Soleimani, S. Evaluation of BHK-21 Cell Line for Specific Viruses by Two Different PCR Methods. سامانه مدیریت نشریات علمی, 1401; 77(5): 1631-1637. doi: 10.22092/ari.2021.356543.1867

Evaluation of BHK-21 Cell Line for Specific Viruses by Two Different PCR Methods

Archives of Razi Institute
مقاله 15، دوره 77، شماره 5، آذر و دی 2022، صفحه 1631-1637    اصل مقاله (477.59 K)
نوع مقاله: Original Articles
شناسه دیجیتال (DOI): 10.22092/ari.2021.356543.1867
نویسندگان
F Ziayaeifar1؛ S Soleimani* 2
1Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran
2Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), P.O. Box 31975-148, Karaj, Iran
چکیده
The selection of suitable cell cultures for use in the biological industry as well as research and diagnostic studies is critical. One of the factors affecting cell culture that can affect the results of studies is the contamination with viral agents. Therefore, efforts to preserve the health of cell cultures from contamination sound logical, and the use of virus-free cells is vital in research and diagnostic studies as well as in the manufacturing industries. For this purpose, it is crucial to use fast and correct diagnostic methods to detect the presence of critical viral contaminants in cells. Moreover, the use of susceptible diagnostic methods is also doubly important, especially in the case of contaminants that may remain hidden. Therefore, in this study, the BHK-21C5 cell line, one of the most widely used cells in the production and quality control of biological products and virological studies, was examined in terms of contamination with the most important viruses such as BVD and BLV. Detection of possible contaminants by using two-step RT-PCR to detect the 5ʹ UTR portion of the BVD virus. Moreover, Nested PCR was carried out to detect the BLV virus using the gp51 env gene region. Also, an Flk cell line and Hela cell line that were consistently contaminated with the BLV virus were used as positive controls in Nested PCR. Due to the absence of bands in the BHK-21C5 cell column and the bandwidth observed in the positive control column (BVDV) in the range of 283 bp, non-contaminating of the cell clone with the BVD virus was proved. Also, no band was observed in well related to BHK-21C5 cell, and no cell clone contamination with BLV was confirmed, and in wells related to the positive controls (Flk and Hela cells), the bands have seen in the range 444bp. So, the results showed that no obvious or covert viral contamination effect was observed in the cell clone studied. Hence, the use of this cell line seems unobstructed in the quality control and production of biological products and research and diagnostic studies.
کلیدواژه‌ها
Cell؛ Viral Contamination؛ Nested PCR
عنوان مقاله [English]
ارزیابی لاین سلولی BHK-21 از نظر آلودگی به ویروس های اختصاصی با استفاده از دو روش متفاوت PCR
چکیده [English]
انانتخاب کشت های سلولی مناسب برای استفاده در صنایع بیولوژی و همچنین تحقیقات و مطالعات تشخیصی بسیار حیاتی است. یکی از عوامل مؤثر بر کشت های سلولی که می تواند نتایج مطالعات را تحت تأثیر قرار دهد، آلودگی این سلول ها به عوامل ویروسی است. بنابراین، تلاش برای حفظ سلامت کشت های سلولی از آلودگی و استفاده از سلول های عاری از ویروس در تحقیقات و مطالعات تشخیصی و همچنین در صنایع تولیدی بسیار مهم است. بدین منظور استفاده از روش های تشخیصی سریع و صحیح برای تشخیص وجود آلاینده های ویروسی مهم در سلول ها حائز اهمیت است. علاوه بر این، استفاده از روش های تشخیصی بسیار حساس نیز اهمیت دو چندانی دارد، به ویژه در مورد آلاینده هایی که ممکن است پنهان بمانند. بنابراین در این مطالعه رده سلولی BHK-21C5 که یکی از پرکاربرد ترین سلول ها در تولید و کنترل کیفی محصولات بیولوژیکی و همچنین مطالعات ویروس شناسی است، از نظر آلودگی به مهم ترین ویروس ها یعنی BVD و BLV مورد بررسی قرار گرفت. شناسایی آلاینده‌های احتمالی با استفاده از RT-PCR دو مرحله‌ای برای شناسایی بخش 5' UTR ویروس BVD انجام شد. علاوه بر این، Nested PCR برای شناسایی ویروس BLV با استفاده از ناحیه ژن gp51 env انجام گرفت. همچنین، یک رده سلولی Flk و رده سلولی Hela که به طور مداوم به ویروس BLV آلوده بودند به عنوان کنترل مثبت در Nested PCR استفاده شد. با توجه به مشاهده باند 283 bp در کنترل مثبت ویروس BVD و عدم مشاهده این باند در سلول BHK، هیچ گونه آلودگی ناشی از این ویروس در این سلول ردیابی نشد. همچنین با توجه به ظهور باند 444 bp در سلول های کنترل مثبت یعنی سلول Hela و سلول FLK مربوط به ویروس BL و عدم مشاهده این باند در سلول BHK، این سلول آلوده به این ویروس نیز نمی باشد. بنابراین نتایج نشان داد که هیچ اثری از آلودگی ویروسی آشکار یا پنهان در کلون سلولی مورد مطالعه مشاهده نشد. از این رو استفاده از این کلون سلولی در کنترل کیفی و تولید محصولات بیولوژیکی و مطالعات تحقیقاتی و تشخیصی بلامانع می باشد.
کلیدواژه‌ها [English]
سلول, آلودگی ویروسی, واکنش زنجیره ای پلیمراز
مراجع
  1. Mahmood A, Ali S. Microbial and Viral Contamination of Animal and Stem Cell Cultures: Common Contaminants, Detection, and Elimination. J Stem Cell Res Ther. 2017;2(5):1-8.
  2. Pamies D, Bal-Price A, Simeonov A, Tagle D, Allen D, Gerhold D, et al. Good cell culture practice for stem cells and stem-cell-derived models. Alternatives to Animal Experimentation: ALTEX. 2017;34(1):95-132.
  3. De Oliveira TFP, Fonseca Jr AA, Camargos MF, de Oliveira AM, Cottorello ACP, dos Reis Souza A, et al. Detection of contaminants in cell cultures, sera and trypsin. Biologicals. 2013;41(6):407-14.
  4. Neill JD. Molecular biology of bovine viral diarrhea virus. Biologicals. 2013;41(1):2-7.
  5. Giangaspero M. Pestivirus species potential adventitious contaminants of biological products. Trop Med Surg. 2013;1(153):2.
  6. Polat M, Takeshima S-n, Aida Y. Epidemiology and genetic diversity of bovine leukemia virus. Virol J. 2017;14(1):209.
  7. WHO. Recommendations for the evaluation of animal cell cultures as cell substrates for the manufacture of biological medicinal products and for the characterization of cell banks. World Health Organization, Annex. 2013;3.
  8. Joshi M, Deshpande J. Polymerase chain reaction: methods, principles and application. Int J Biomed Res. 2010;2(1):81-97.
  9. Park JS, Moon HJ, Lee BC, Hwang WS, Yoo HS, Kim DY, et al. Comparative analysis on the 5'-untranslated region of bovine viral diarrhea virus isolated in Korea. Res Vet Sci. 2004;76(2):157-63.
  10. De Giuseppe A, Feliziani F, Rutili D, De Mia GM. Expression of the bovine leukemia virus envelope glycoprotein (gp51) by recombinant baculovirus and its use in an enzyme-linked immunosorbent assay. Clin Diagn Lab Immunol. 2004;11(1):147-51.
  11. Lanyon SR, Hill FI, Reichel MP, Brownlie J. Bovine viral diarrhoea: pathogenesis and diagnosis. Vet J. 2014;199(2):201-9.
  12. Soleimani S, Shahsavandi S, Maddadgar O. Improvement influenza HA2 DNA vaccine cellular and humoral immune responses with Mx bio adjuvant. Biologicals. 2017;46:6-10.
  13. Gombold J, Karakasidis S, Niksa P, Podczasy J, Neumann K, Richardson J, et al. Systematic evaluation of in vitro and in vivo adventitious virus assays for the detection of viral contamination of cell banks and biological products. Vaccine. 2014;32(24):2916-26.
  14. Letellier C, Kerkhofs P. Real-time PCR for simultaneous detection and genotyping of bovine viral diarrhea virus. J Virol Methods. 2003;114(1):21-7.
  15. Ridpath JF, Bolin SR. Differentiation of types 1a, 1b and 2 bovine viral diarrhoea virus (BVDV) by PCR. Mol Cell Probes. 1998;12(2):101-6.
  16. Green MR, Sambrook J. Amplification of cDNA generated by reverse transcription of mRNA: Two-step reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). Cold Spring Harb Protoc. 2019;2019(5).
  17. Alansari H, Brock K, Potgieter L. Single and double polymerase chain reaction for detection of bovine viral diarrhea virus in tissue culture and sera. J Vet Diagn Invest. 1993;5(2):148-53.
  18. Lee PY, Costumbrado J, Hsu C-Y, Kim YH. Agarose gel electrophoresis for the separation of DNA fragments. J Vis Exp. 2012(62):3923.
  19. Asfaw Y, Tsuduku S, Konishi M, Murakami K, Tsuboi T, Wu D, et al. Distribution and superinfection of bovine leukemia virus genotypes in Japan. Arch Virol. 2005;150(3):493-505.
  20. Hemmatzadeh F. Sequencing and phylogenetic analysis of gp51 gene of bovine leukaemia virus in Iranian isolates. Vet Res Commun. 2007;31(6):783-9.
  21. Hafz EM, Salama AA, Soliman AM, Ismail ME-BA, Farag GK, Ali AAE-SH. Detection of Bovine Viral Diarrhea Virus in some Vaccines, Sera and Cell Cultures. Zagazig Vet J. 2017;45(1):314-22.
  22. Routray I, Mahmood A, Ngwa N, Tasleem M, Sahin K, Kucuk O. Cell Line Cross-Contamination and Accidental Co-Culture. J Stem Cell Res Ther. 2016;1(5):00031.
  23. Olaya-Galan N, Corredor-Figueroa A, Guzman-Garzon T, Rios-Hernandez K, Salas-Cardenas S, Patarroyo M, et al. Bovine leukaemia virus DNA in fresh milk and raw beef for human consumption. Epidemiol Infect. 2017;145(15):3125-30.
  1. Hou P, Xu Y, Wang H, He H. Detection of bovine viral diarrhea virus genotype 1 in aerosol by a real time RT-PCR assay. BMC Vet Res. 2020;16:1-9.
  2. Corredor-Figueroa AP, Salas S, Olaya-Galán NN, Quintero JS, Fajardo Á, Soñora M, et al. Prevalence and molecular epidemiology of bovine leukemia virus in Colombian cattle. Infect Genet Evol. 2020;80:104171.
  3. Buehring GC, DeLaney A, Shen H, Chu DL, Razavian N, Schwartz DA, et al. Bovine leukemia virus discovered in human blood. BMC Infect Dis. 2019;19(1):297.
آمار
تعداد مشاهده مقاله: 486
تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 186


counter
سامانه مدیریت نشریات علمی. قدرت گرفته از سیناوب