Bahmanjeh, A, Ataei Kachooei, S, Faezi Ghasemi, M, Mosavari, N, Hassanzadeh, S. M. (1400). Comparison of Cattle Serum Antibody Responses to Five Different Mycobacterial Antigens in an ELISA System. سامانه مدیریت نشریات علمی, 76(5), 1269-1278. doi: 10.22092/ari.2020.351794.1532
A Bahmanjeh; S Ataei Kachooei; M Faezi Ghasemi; N Mosavari; S. M Hassanzadeh. "Comparison of Cattle Serum Antibody Responses to Five Different Mycobacterial Antigens in an ELISA System". سامانه مدیریت نشریات علمی, 76, 5, 1400, 1269-1278. doi: 10.22092/ari.2020.351794.1532
Bahmanjeh, A, Ataei Kachooei, S, Faezi Ghasemi, M, Mosavari, N, Hassanzadeh, S. M. (1400). 'Comparison of Cattle Serum Antibody Responses to Five Different Mycobacterial Antigens in an ELISA System', سامانه مدیریت نشریات علمی, 76(5), pp. 1269-1278. doi: 10.22092/ari.2020.351794.1532
Bahmanjeh, A, Ataei Kachooei, S, Faezi Ghasemi, M, Mosavari, N, Hassanzadeh, S. M. Comparison of Cattle Serum Antibody Responses to Five Different Mycobacterial Antigens in an ELISA System. سامانه مدیریت نشریات علمی, 1400; 76(5): 1269-1278. doi: 10.22092/ari.2020.351794.1532
Comparison of Cattle Serum Antibody Responses to Five Different Mycobacterial Antigens in an ELISA System
1Department of Microbiology, Faculty of Basic Sciences, Lahijan Branch, Islamic Azad University, Lahijan, Iran
2Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Tehran, Iran
3Vaccine Production Unit, Research & Production Complex, Pasteur Institute of Iran, Karaj, Iran
چکیده
The presence of common zoonosis diseases caused by Mycobacterium tuberculosiscomplex (MTBC) and nontuberculous mycobacteria (NTM), such as Johne's and Crohn's diseases, poses a public health threat and economic losses to Iranian livestock. Therefore, the early detection of mycobacteria is of paramount importance. In this regard, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is a new, simple to use, rapid, and useful diagnostic tool. This study was performed to evaluate different crude antigens obtained from Mycobacterium species using an indirect ELISA test to identify the mycobacterial infection in infected livestock. Five different strains of Mycobacteria including M. tuberculosis, M. phlei, M. bovis, M. avium subspecies paratuberculosis, and M. bovis AN5 were cultured. The crude antigens in the samples were precipitated with trichloroacetic acid 4%. Thesodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresisof crude antigens isolated from different Mycobacterium species was reported. The total level of protein was determined by the Lowry protein assay. After the crude antigen preparation, the ELISA test was performed and the results were compared with the purified protein derivative skin test. Data analysis was performed using SPSS software version 25.All five strains were detected in more than 92% of healthy animals. The highest sensitivity of ELISA tests was in M. bovis AN5 antigen which was greater than 83%. The highest diagnostic specificity and efficiency of assays were in M.avium subspecies paratuberculosis which was 95.83% and over 83%, respectively. Regarding the results, M. aviumsubspeciesparatuberculosis and M. bovis AN5 antigens were promising candidates for the design of diagnostic ELISA due to their sensitivity, specificity, and efficiency.
مقایسه پاسخ آنتی بادی سرم گاو به پنج آنتی ژن مختلف مایکوباکتریائی با استفاده از تست الایزا
چکیده [English]
با توجه به وجود بیماری های مشترک بین انسان و دام ناشی از کمپلکس مایکوباکتریوم توبرکلوزیس (MTBC) و مایکوباکتریوم های غیر توبرکلوزیسی (NTM) ، مانند بیماری یون در حیوانات و بیماری کرون در انسان، تشخیص به موقع مایکوباکتریوم می تواند به کنترل این بیماری ها ومشکلات بهداشتی و خسارات بزرگ اقتصادی در دام های ایران کمک شایانی کند. از جمله روش های تشخیصی پر کاربرد، روش ELISA است که روشی آسان، سریع و مفید است. در این تحقیق، ما سعی در ارزیابی آنتی ژن های خام گونه های مختلف مایکوباکتری با استفاده از یک آزمایش ELISA غیر مستقیم داشتیم. هدف از این ارزیابی تشخیص عفونت های مایکوباکتریائی مختلف در دامهای آلوده است. پنج سویه مختلف مایکوباکتریوم کشت شد و توسط 4٪ TCA رسوب داده شد. SDS-PAGE آنتی ژن های خام مایکوباکتریوم های مختلف انجام شد. غلظت پروتئین ها با روش پروتئین سنجی لوری تعیین شد. پس از تهیه آنتی ژن های خام مایکوباکتریوم، آزمایش ELISA انجام شد و نتایج آزمون ELISA با آزمایش PPD پوستی مقایسه و تجزیه و تحلیل داده ها با نرم افزار SPSS انجام شد. در نتیجه این مطالعه، همه آنتی ژن های مورد مطالعه بیش از 92 درصد توانایی تشخیص دام های سالم را داشتند. بیشترین حساسیت آزمایش های ELISA به آنتی ژن مایکوباکتریوم بوویس سویه AN5 بیش از 83 درصد و بالاترین ویژگی تشخیصی مایکوباکتریوم آویوم زیر گونه پاراتوبرکلوزیس 83/95 درصد و بالاترین بازده آزمایشهای تشخیصی بیش از 83 درصد در رابطه با این آنتی ژن است. از این مطالعه نتیجه گیری شد که مایکوباکتریوم آویوم زیر گونه پاراتوبرکلوزیس به دلیل حساسیت، ویژگی و کارایی، کاندید مناسبی برای طراحی الایزا تشخیصی است.
کلیدواژهها [English]
مایکوباکتریوم, مایکوباکتری های غیر توبرکلوزیسی, پی پی دی, الایزا
Olaleye A, Beke A. Determinants of Survival of Patients with Tuberculosis in Developing Countries. Tuberculosis: IntechOpen; 2018.
Honda J, Virdi R, Chan ED. Global environmental nontuberculous mycobacteria and their contemporaneous man-made and natural niches. Front Microbiol. 2018;9:2029.
Tientcheu LD, Koch A, Ndengane M, Andoseh G, Kampmann B, Wilkinson RJ. Immunological consequences of strain variation within the Mycobacterium tuberculosis complex. Eur J Immunol. 2017;47(3):432-45.
Xu J-N, Chen J-P, Chen D-L. Serodiagnosis efficacy and immunogenicity of the fusion protein of Mycobacterium tuberculosis composed of the 10-kilodalton culture filtrate protein, ESAT-6, and the extracellular domain fragment of PPE68. Clin Vaccine Immunol. 2012;19(4):536-44.
Harboe M, Mshana R, Closs O, Kronvall G, Axelsen N. Cross‐reactions between Mycobacteria: II. Crossed Immunoelectrophoretic Analysis of Soluble Antigens of BCG and Comparison with Other Mycobacteria. Scand J Immunol. 1979;9(2):115-24.
Wang X, Chen S, Xu Y, Zheng H, Xiao T, Li Y, et al. Identification and evaluation of the novel immunodominant antigen Rv2351c from Mycobacterium tuberculosis. Emerg Microbes Infect. 2017;6(1):1-8.
Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J Biol Chem. 1951;193:265-75.
Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970;227(5259):680.
Cheon SA, Cho HH, Kim J, Lee J, Kim H-J, Park TJ. Recent tuberculosis diagnosis toward the end TB strategy. J Microbiol Methods. 2016;123:51-61.
Porvaznik I, Solovič I, Mokrý J. Non-tuberculous mycobacteria: classification, diagnostics, and therapy. Respiratory Treatment and Prevention: Springer; 2016. p. 19-25.
Barreto ML, Pereira SM, Ferreira AA. BCG vaccine: efficacy and indications for vaccination and revaccination. J Pediatr. 2006;82(3):s45-s54.
Mori T, Sakatani M, Yamagishi F, Takashima T, Kawabe Y, Nagao K, et al. Specific detection of tuberculosis infection: an interferon-γ–based assay using new antigens. Am J Respir Crit Care Med. 2004;170(1):59-64.
Araujo Z, De Waard J, Fernández de Larrea C, López D, Fandiño C, Maldonado A, et al. Study of the antibody response against Mycobacterium tuberculosis antigens in Warao Amerindian children in Venezuela. Mem. Inst. Oswaldo Cruz. 2004;99(5):517-24.
Rouhollah K, Ali M, Nader M, Keyvan T, Shamseddin G, Farzaneh F, et al. Development and optimization a high sensitive and specific ELISA system for rapid detection of paratuberculosis in cattle. Int J Adv Biotechnol Res. 2016;7(1):1-9.
MERKAL RS. A method for avoiding false-positive reactions in an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the diagnosis of bovine paratuberculosis. Jpn J Vet Res. 1985;47(1):111-9.
Gupta V, Ram G, Bansal M. Antigenic characterization of Mycobacteriumbovis BCG soluble antigens. Vet Microbiol. 1994;38(3):227-40.
Radin RC, Zeiss R, Phair JP. Antibodies to purified protein derivative in different immunoglobulin classes in the diagnosis of tuberculosis in man. Int Arch Allergy Immunol. 1983;70(1):25-9.
Meikle V, Alito A, Llera AS, Gioffré A, Peralta A, Buddle B, et al. Identification of novel Mycobacterium bovis antigens by dissection of crude protein fractions. Clin Vaccine Immunol. 2009;16(9):1352-9.