Azizi, M. R, Asli, E, Behroozikhah, A. M, Khalesi, B. (1400). Flow Cytometric Evaluation of CD4+ and CD8+ T-cell Immune Response in SPF Chickens Induced by Fowlpox Vaccine. سامانه مدیریت نشریات علمی, 76(3), 429-436. doi: 10.22092/ari.2020.343514.1508
M. R Azizi; E Asli; A. M Behroozikhah; B Khalesi. "Flow Cytometric Evaluation of CD4+ and CD8+ T-cell Immune Response in SPF Chickens Induced by Fowlpox Vaccine". سامانه مدیریت نشریات علمی, 76, 3, 1400, 429-436. doi: 10.22092/ari.2020.343514.1508
Azizi, M. R, Asli, E, Behroozikhah, A. M, Khalesi, B. (1400). 'Flow Cytometric Evaluation of CD4+ and CD8+ T-cell Immune Response in SPF Chickens Induced by Fowlpox Vaccine', سامانه مدیریت نشریات علمی, 76(3), pp. 429-436. doi: 10.22092/ari.2020.343514.1508
Azizi, M. R, Asli, E, Behroozikhah, A. M, Khalesi, B. Flow Cytometric Evaluation of CD4+ and CD8+ T-cell Immune Response in SPF Chickens Induced by Fowlpox Vaccine. سامانه مدیریت نشریات علمی, 1400; 76(3): 429-436. doi: 10.22092/ari.2020.343514.1508
Flow Cytometric Evaluation of CD4+ and CD8+ T-cell Immune Response in SPF Chickens Induced by Fowlpox Vaccine
1Department of Microbiology, Faculty of Sciences, Islamic Azad University, Karaj Branch, Karaj, Iran
2Department of Research & Development, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran
3Department of Brucella Vaccines Production, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran
4Department of Poultry Vaccines Production, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran
چکیده
Fowlpox (FP) is a viral disease that is widely distributed throughout the world. The disease has an economic impact on the poultry industry, and its prevalence has even been reported in vaccinated flocks. The present study used flow cytometry to evaluate the CD4+ and CD8+ T-cell immune response of chicks induced by FP vaccine. 120 specific pathogen-free (SPF) 21-day-old chicks were randomly divided into three groups of 40. One group was used as negative control with PBS inoculation, the other two groups were inoculated with the local fowlpox vaccine produced by Razi Institute and commercial FP vaccines, and they were kept for five weeks. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated using Ficoll–Hypaque density gradients and the percentages of CD3+, CD3+, CD4+, and CD3+CD8+ T lymphocytes were analyzed with flow cytometry. Seven days post-immunization, a maximum (90-100%) swelling formation (“take”) on the vaccination site was observed. The ratios of CD4+ to CD8+ T-lymphocytes in both vaccinated groups were significantly higher (p < 0.05) than the control group inoculated with PBS. The percentages of CD3+, CD3+CD4+, and CD3+CD8+ T-lymphocytes were increased in chickens vaccinated with commercial and local FP vaccines. There were no significant differences between the groups receiving commercial and local fowl pox vaccines. The present study showed that protective immunity could be associated with increased cellular immune responses, which has been interpreted as enhancing T-cell proliferation and increasing CD4+ to CD8+ ratios through vaccination with the FP vaccine. This study further suggests that the induction of enhanced immune responses is due mainly to the Th1-type response.
یابی پاسخ ایمنی سلولهای CD4 T- و T-CD8متعاقب تزریق واکسن آبله طیور در جوجه های SPF به روش فلوسایتومتری
چکیده [English]
آبله طیور یک بیماری ویروسی است که گستردگی جهانی دارد. بیماری آبله سبب خسارت اقتصادی بر صنعت طیور میگردد. شیوع آن در گله های واکسینه شده نیز گزارش شده است. هدف از این مطالعه بررسی پاسخ ایمنی سلولی جوجه های عاری از پاتوژن (ُSPF) پس از تزریق واکسن آبله طیور با روش فلوسیتومتری می باشد. تعداد 120 جوجه SPF (21 روزه) به سه گروه 40 تایی به صورت تصادفی تقسیم شدند. یک گروه به عنوان کنترل منفی با تلقیح PBS و دو گروه دیگر با واکسن آبله طیور ساخت موسسه رازی و واکسن تجاری تلقیح شدند. سلولهای تک هسته ای خون محیطی (PBMCs) از نمونه های خون هر گروه حاوی EDTA، با استفاده از گرادیانت فایکول جدا شدند. درصد جمعیت سلولی لنفوسیت های T CD3+، CD3+ CD4+ وCD3+ CD8+ با استفاده از روش فلوسایتومتری مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. نتایج این مطالعه نشان دادکه حداکثر 7 روز پس از واکسیناسیون تقریبا تمامی نمونه های واکسینه شده دارای تورم در محل تزریق بودند. گروه های واکسینه شده نسبت به گروه کنترل بیان بالاتری از لنفوسیت های T را داشتند. درصد جمعیت سلولی لنفوسیت های CD4+ و CD8+ در جوجه های واکسینه شده با واکسن تجاری و واکسن موسسه رازی افزایش یافت و تفاوت معنا داری بین دو گروه واکسن تجاری و واکسن موسسه رازی وجود نداشت (P < 0.05). نسبت لنفوسیت های CD4+ به لنفوسیت های CD8+ در هر دو گروه از گروه های واکسینه شده، به وسیله واکسن آبله طیور موسسه رازی و واکسن تجاری، از گروه شاهد که تنها به وسیله PBS مایه کوبی شده بودند به طور قابل توجهی بالاتر بود. نتایج مطالعه حاضر نشان داد که پاسخ سیستم ایمنی جوجه ها پس از تلقیح واکسن آبله با افزایش فعالیت سیستم ایمنی سلولی همراه است و که به شکل تکثیر سلول های لنفوسیت T و افزایش نسبت CD4+ به CD8+ (به دلیل تزریق واکسن آبله طیور) را سبب شده است. در این مطالعه مشخص گردید که بطور عمده القاء افزایش واکنش های ایمنی توسط سلولهای نوع Th1 اتفاق میافتد.
Manarolla G, Pisoni G, Sironi G, Rampin T. Molecular biological characterization of avian poxvirus strains isolated from different avian species. Vet Microbiol. 2010;140(1):1-8.
Cottingham MG, Maurik Av, Zago M, Newton AT, Anderson RJ, Howard MK, et al. Different Levels of Immunogenicity of Two Strains of Fowlpox Virus as Recombinant Vaccine Vectors Eliciting T-Cell Responses in Heterologous Prime-Boost Vaccination Strategies. 2006;13(7):747-57.
Skinner M, Laidlaw SM. Advances in fowl pox vaccination. CAB Rev: Perspectives in Agriculture, Veterinary Science, Nutrition and Natural Resources. 4. Wallingford, UK: CABI; 2009. p. 1-11.
Vasfi Marandi M, Bozorgmehri Fard MH. Isolation of H9N2 subtype of avian influenza viruses during an outbreak in chickens in Iran. Iran Biomed J. 2002;6:13-7.
Meeusen ENT, Walker J, Peters A, Pastoret P-P, Jungersen G. Current Status of Veterinary Vaccines. 2007;20(3):489-510)
Mockett APA, Deuter A, Southee DJ. Fowlpox. vaccination: Routes of inoculation and pathological effects. Avian Pathol. 1990;19(4):613-25.
Qureshi MA. Avian macrophage and immune response: an overview. Poultry Sci. 2003;82(5):691-8.
O'Donnell EA, Ernst DN, Hingorani R. Multiparameter Flow Cytometry: Advances in High Resolution Analysis. Immune Netw. 2013;13(2):43-54.
Seo SH, Webster RG. Cross-Reactive, Cell-Mediated Immunity and Protection of Chickens from Lethal H5N1 Influenza Virus Infection in Hong Kong Poultry Markets. J Virol. 2001;75(6):2516-25.
Skinner MA. Fowlpox Virus and Other Avipoxviruses. In: Mahy BWJ, Van Regenmortel MHV, editors. Encyclopedia of Virology (Third Edition). Oxford: Acad Pr; 2008. p. 274-84.
Sant AJ, McMichael A. Revealing the role of CD4+ T cells in viral immunity. Jpn J Exp Med. 2012;209(8):1391-5.
Dalgaard TS, Norup LR, Pedersen AR, Handberg KJ, Jørgensen PH, Juul-Madsen HR. Flow cytometric assessment of chicken T cell-mediated immune responses after Newcastle disease virus vaccination and challenge. Vaccine. 2010;28(28):4506-14.
Lambrecht B, Gonze M, Meulemans G, van denberg TP. Assessment of the cell-mediated immune response in chickens by detection of chicken interferon-γ in response to mitogen and recall Newcastle disease viral antigen stimulation. Avian Pathol. 2004;33(3):343-50.
Svahn A, Linde A, Thorstensson R, Karlén K, Andersson L, Gaines H. Development and evaluation of a flow-cytometric assay of specific cell-mediated immune response in activated whole blood for the detection of cell-mediated immunity against varicella-zoster virus. J Immunol Methods. 2003;277(1):17-25.
Shin JH, Park S-H. B Cells Promote Th1- Skewed NKT Cell Response by CD1d-TCR Interaction. Immune Netw. 2013;13(5):218-21.
Chen H-Y, Cui P, Cui B-A, Li H-P, Jiao X-Q, Zheng L-L, et al. Immune responses of chickens inoculated with a recombinant fowlpox vaccine coexpressing glycoprotein B of infectious laryngotracheitis virus and chicken IL-18. FEMS. Med Microbiol Immunol. 2011;63(2):289-95.
Xue M, Shi X, Zhao Y, Cui H, Hu S, Cui X, et al. Effects of Reticuloendotheliosis Virus Infection on Cytokine Production in SPF Chickens. PLoS One. 2013;8(12):e83918.
Kannan TA, Geetha R, Ushakumari S, Dhinakarraj G, S. V. Flow cytometric analysis of CD4+ and CD8+ T Cells in spleen of chicken (gallus domesticus). Indian J Vet Anato. 2012;24:54-5.
Andersen SH, Vervelde L, Sutton K, Norup LR, Wattrang E, Juul-Madsen HR, et al. Quantification and phenotypic characterisation of peripheral IFN-γ producing leucocytes in chickens vaccinated against Newcastle disease. Vet Immunol Immunopathol. 2017;193-194:18-28.