| تعداد نشریات | 285 |
| تعداد نشریات سازمان | 83 |
| تعداد شمارهها | 3,129 |
| تعداد مقالات | 34,770 |
| تعداد مشاهده مقاله | 50,038,950 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 80,312,793 |
Isolation and Purification of Low Molecular Weight Proteins from Culture Filtrate of Mycobacterium Tuberculosis Strain C | ||
| Archives of Razi Institute | ||
| مقاله 11، دوره 76، شماره 2، شهریور 2021، صفحه 273-282 اصل مقاله (427.24 K) | ||
| نوع مقاله: Original Articles | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.22092/ari.2020.127691.1390 | ||
| نویسندگان | ||
| M Khosrobeygi1؛ N Mosavari* 2؛ M Salehi1؛ N Mojgani2؛ M Akbari3 | ||
| 1Department of Biological Sciences, North Tehran Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran | ||
| 2Reference Laboratory of Bovine Tuberculosis, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran | ||
| 3Department of Microbiology, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran | ||
| چکیده | ||
| In the last couple of years, a number of new and rapid tests for the diagnosis of Tuberculosis (TB) have been developed based on the low molecular weight antigens from Mycobacterium tuberculosis (Mtb) culture supernatant. This study aimed to isolate and purify low molecular weight antigens secreted by Mtb strain C for diagnostic purpose. The secretory proteins from culture filtrate of Mtb were extracted using ammonium sulphate precipitations and sephadex-G50 gel chromatography. The obtained antigen fractions were analyzed for their protein concentrations and approximate molecular weight using Lowry method and SDS-PAGE (12.5%), respectively. DOT-ELISA and Western blot assay was performed to confirm the presence of purified low molecular weight proteins isolated from Mtb using sera from pulmonary tuberculosis patients (polyclonal antibodies). During chromatography, low molecular weight proteins were separated, that was approximately 0.7 mg/ml of the total proteins (1.662 mg/ml). The purified protein fractions in molecular weight range of 14 kDa-41kDa appeared during SDS-PAGE analysis. The chromatographic band fraction in the weight range of 30-41 kDa was identified in the TB patients’ sera using Western blotting. The low molecular weight proteins in the culture filtrate of Mtb strain C were purified using ammonium sulphate and chromatography. These fractions were confirmed using Western blotting. The obtained results might support the hypothesis that the Mtb culture filtrate antigens could be used as a rapid and sensitive assay for the detection of patients with pulmonary TB. | ||
| کلیدواژهها | ||
| Chromatography؛ Dot enzyme-linked immunosorbent assay؛ Mycobacterium tuberculosis؛ Sodium dodecyl sulphate–polyacrylamide gel electrophoresis؛ Western-blot | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| جداسازی و خالص سازی پروتئین های سبک وزن از فیلترای کشت مایکوباکتریوم توبرکلوزیس سویه سی (ATCC 35808) | ||
| چکیده [English] | ||
| در چندسال گذشته، تعدادی از آزمایشات جدید و سریع با هدف تشخیص بیماری سل توسعه یافته است که بر پایه آنتی ژن های سبک وزن ترشح شده از مایکوبکتریوم توبرکلوزیس می باشند که در محیط کشت باکتری ترشح می شوند. ما در این مطالعه، جداسازی و خالص سازی آنتی ژن های با وزن موکلولی پایین که از Mtb سویه C ترشح می شوند و استفاده از آنها جهت اهداف تشخیصی را مورد هدف قرار دادیم. در این مطالعه، پروتئین های ترشحی Mtb با استفاده از رسوب دهی توسط نمک سولفات آمونیوم وژل کروماتوگرافی ستون Sephadex-G50 استخراج شدند. فرکشن های آنتی ژنی به دست آمده برای تعیین غلظت پروتئین و تخمین وزن تقریبی مولکولی آنها به ترتیب با روش لوری و SDS PAGE (12.5%) مورد بررسی قرار گرفتند. سنجش DOT-ELISA و وسترن بلات با استفاده از سرم بیماران مبتلا به سل ریوی (آنتی بادی های پلی کلونال) برای تأیید حضور پروتئین های خالص شده با وزن مولکولی کم، جدا شده از Mtbانجام شد. با استفاده از ژل کروماتوگرافی ، پروتئین های با وزن مولکولی پایین جدا شدند که تقریباً 7/0میلی گرم در میلی لیتر از کل پروتئین ها (662/1 میلی گرم در میلی لیتر) بود. در تجزیه و تحلیل SDS-PAGE ، پروتئین های خالص با وزن مولکولی در محدوده 14kDa تا41kDa ظاهر شدند. در آنالیز وسترن بلات فرکشن های کروماتوگرافی شده با استفاده از سرم بیماران سل، ما توانستیم باندهایی را در محدوده 30kDa تا 41kDa شناسایی کنیم. پروتئین های با وزن مولکولی پایین موجود در فیلتراسیون کشت Mtb سویه C با استفاده از نمک سولفات آمونیوم و کروماتوگرافی خالص شدند. این فرکشن ها با روش وسترن بلات تأیید شدند. نتایج به دست آمده ممکن است این فرضیه را پشتیبانی کند که آنتی ژن های موجود در فیتراسیون کشت Mtb می تواند به عنوان یک روش سریع و حساس برای شناسایی بیماران مبتلا به سل ریوی مورد استفاده قرار گیرد. | ||
| کلیدواژهها [English] | ||
| مایکوباکتریوم توبرکلوزیس، کروماتوگرافی، SDSP-AGE, DOT-ELISA, Western-Blot | ||
|
سایر فایل های مرتبط با مقاله
|
||
| مراجع | ||
|
Abebe, F., Belay, M., Legesse, M., 2018. IFN-γ against the 38-kDa antigen of Mycobacterium tuberculosis discriminates pulmonary tuberculosis from infection and infection from exposure: evidence from a study of human population in a high endemic setting. APMIS 126, 135-142.
Alegria-Schaffer, A., Lodge, A., Vattem, K., 2009. Performing and optimizing Western blots with an emphasis on chemiluminescent detection. Methods Enzymol 463,
573-599.
Arend, S.M., Andersen, P., van Meijgaarden, K.E., Skjøt, R.L.V., Subronto, Y.W., van Dissel, J.T., et al., 2000. Detection of Active Tuberculosis Infection by T Cell Responses to Early-Secreted Antigenic Target 6-kDa Protein and Culture Filtrate Protein 10. J Infect Dis 181, 1850-1854.
Babaie M, Salmanizadeh H, Zolfagharian H., 2013. Blood Coagulation induced by Iranian saw-scaled viper (Echis Carinatus) venom: Identification, purification and characterization of a prothrombin activator. Iran J Basic Med Sci. 16(11): 1145-1150
Beck, S.T., Leite, O.M., Arruda, R.S., Ferreira, A.W., 2005a. Combined use of Western blot/ELISA to improve the serological diagnosis of human tuberculosis. Braz J Infect Dis 9, 35-43.
Beck, S.T., Leite, O.M., Arruda, R.S., Ferreira, A.W., 2005b. Humoral response to low molecular weight antigens of Mycobacterium tuberculosis by tuberculosis patients and contacts. Braz J Med Biol Res 38, 587-596.
Berthet, F.-X., Rasmussen, P.B., Rosenkrands, I., Andersen, P., Gicquel, B., 1998. A Mycobacterium tuberculosis operon encoding ESAT=6 and a novel low-molecular-mass culture filtrate protein (CFP-10). Microbiology 144, 3195-3203.
Chakravorty, S., Sen, M.K., Tyagi, J.S., 2005. Diagnosis of extrapulmonary tuberculosis by smear, culture, and PCR using universal sample processing technology. J Clin Microbiol 43, 4357-4362.
De Jonge MI, Pehau-Arnaudet G, Fretz Mm, Romain F, Bottai D, Brodin P, et al., 2007. ESAT-6 from Mycobacterium tuberculosis dissociates from its putative chaperone CFP-10 under acidic conditions and exhibits membrane-lysing activity. J Bacteriol 189, 6028-6034.
El-Masry, S., El-Kady, I., Zaghloul, M.H., Al-Badrawey, M.K., 2008. Rapid and simple detection of a mycobacterium circulating antigen in serum of pulmonary tuberculosis patients by using a monoclonal antibody and Fast-Dot-ELISA. Clin Biochem 41, 145-151.
Espitia, C., Cervera, I., González, R., Mancilla, R., 1989. A 38-kD Mycobacterium tuberculosis antigen associated with infection. Its isolation and serologic evaluation. Clin Exp Immunol 77, 373-377.
Fong, G.W., Lam, S.K., 1991. HPLC in the Pharmaceutical Industry, CRC Press, Boca Raton, Florida.
Fountoulakis, M., Takcs, B., 2002. Enrichment and proteomic analysis of low-abundance bacterial proteins. Methods Enzymol 358, 288-306.
Getahun, H., Gunneberg, C., Granich, R., Nunn, P., 2010. HIV Infection–Associated Tuberculosis: The Epidemiology and the Response. Clin Infect Dis 50, S201-S207.
Harth, G., Lee, B.Y., Wang, J., Clemens, D.L., Horwitz, M.A., 1996. Novel insights into the genetics, biochemistry, and immunocytochemistry of the 30-kilodalton major extracellular protein of Mycobacterium tuberculosis. Infect Immun 64, 3038-3047.
Horwitz, M.A., Lee, B.W., Dillon, B.J., Harth, G., 1996. Protective immunity against tuberculosis induced by vaccination with major extracellular proteins of Mycobacterium tuberculosis. Proc Natl Acad Sci 92, 1530-1534.
Laemmli, U.K., 1970. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4. Nature 227, 680-685.
Min, F., Pan, J., Wu, R., Chen, M., Kuang, H., Zhao, W., 2015. Profiling serum antibodies to Mycobacterium tuberculosis proteins in rhesus monkeys with nontuberculous Mycobacteria. Exp Anim 65, 11-16.
Rovatti, E., Corradi, M.P., Amicosante, M., Tartoni, P.L., Panini, W., Ancora, A., et al., 1996. Evaluation of a western blot serum test for the diagnosis of Mycobacterium tuberculosis infection. Eur Respir J 9, 288-292.
Senol, G., Erer, O.F., Yalcin, Y.A., Coskun, M., Gndz, A.T., Bimen, C., et al., 2007. Humoral immune response against 38-kDa and 16-kDa mycobacterial antigens in tubercolosis. Eur Respir J 29, 143-148.
Shen, G.H., Chiou, C.S., Hu, S.T., Wu, K.M., Chen, J.H., 2011. Rapid identification of the Mycobacterium tuberculosis complex by combining the ESAT-6/CFP-10 immunochromatographic assay and smear morphology. J Clin Microbiol 49, 902-907.
Sonawane, A., Mohanty, S., Jagannathan, L., Bekolay, A., Banerjee, S., 2012. Role of glycans and glycoproteins in disease development by Mycobacterium tuberculosis. Crit Rev Microbiol 38, 250-266.
Weldingh, K., Rosenkrands, I., Okkels, L.M., Doherty, T.M., Andersen, P., 2005. Assessing the Serodiagnostic Potential of 35 Mycobacterium tuberculosis Proteins and Identification of Four Novel Serological Antigens. J Clin Microbiol 43, 57-65.
Wu, X., Yang, Y., Zhang, J., Li, B., Liang, Y., Zhang, C., et al., 2010. Comparison of antibody responses to seventeen antigens from Mycobacterium tuberculosis. Clinica Chimica Acta 411, 1520 - 1528.
Yang, H., Kruh-Garcia, N.A., Dobos, K.M., 2012. Purified protein derivatives of tuberculin - past, present, and future. FEMS Immunol Med Microbiol 66, 273-280.
Young, D., Kent, L., Rees, A., Lamb, J., Ivanyi, J., 1986. Immunological activity of a 38-kilodalton protein purified from Mycobacterium tuberculosis. Infect Immun 54, 177-183.
Young, D.B., Kaufmann, S.H.E., Hermans, P.W.M., Thole, J.E.R., 1992. Mycobacterial protein antigens: a compilation. Mol Microbiol 6, 133-145. | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 2,524 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 2,926 |
||
