1استادیار دانشکده دامپزشکی، دانشگاه سمنان، سمنان، ایران
2گروه پرورش طیور، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فنی و حرفه ای پاکدشت، تهران، ایران
3دانش آموخته دکتری تغذیه دام، دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران
4دانشآموخته کارشناسی ارشد تغذیه دام، دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران
چکیده
بیماری اسکراپی در گوسفندان، بیماری تحلیل برنده نورونهای عصبی است که به دلیل تاخوردگی غیرمعمول پروتئین پریون در مغز، که باعث ایجاد شکل مقاوم این پروتئین میشود، بوجود میآید. فاکتورهای ایمنولوژیکی و ژنتیکی علل عمده ایجاد کننده این اسکراپی ذکر شدند. از جمله این فاکتورهای ژنتیکی که ممکن است در ایجاد و یا پیشرفت بیماری نقش داشته باشند، وجود چندشکلی کدون شماره 171 از ژن پروتئین پریون میباشد. هدف از مطالعه حاضر بررسی چندشکلی کدون 171 ژن PrP در گوسفند سنگسری است. در این تحقیق ابتدا، نمونههای خون از 150 رأس گوسفند از مرکز اصلاح نژاد دامغان، بهوسیله ونوجکتهای آغشته به ماده ضد انعقاد (EDTA) تهیه و DNAی آنها بهروش نمکی بهینه یافته (salting out) استخراج گردید. بعد از استخراج DNA و انجام آزمایشات کمی و کیفی (اسپکتروفوتومتر و ژل آگاروز 8/0 درصد)، قطعه مورد نظر در PCR با استفاده از پرایمر مربوطه، تکثیر یافته و سپس فرآوردههای PCR توسط آنزیم Sau3AI برای جایگاه 171 برش داده شد. الکتروفورز قطعات حاصل از هضم روی ژل آگارز انجام و ژنوتیپ هر فرد تعیین گردید. فراوانیهای آللی، ژنوتیپی و هاپلوتیپی با شمارش مستقیم به دست آمد. توالیهای قبل و بعد از مکان برش با استفاده از نرمافزارPrimer Premier مشخص گردید. نتایج نشان داد که فراوانی ژنوتیپهای R/R، R/Q و Q/Q بهترتیب 87، 8 و 5 درصد میباشند. نتایج آشکار شده برای فراوانی آللهای مورد نظر Q وR بهترتیب 10 و 90 درصد بود. ژنوتیپ Q/Q بیشترین حساسیت را به بیماری اسکراپی داشته و ژنوتیپهای R/R و R/Q مقاوم به بیماری اسکراپی بودند.
Investigation of Polymorphism and Determination of Genotype of Prion Protein Gene (PrP) in the Sangsari Sheep
نویسندگان [English]
Reza Jamshidi1؛ Mehdi Mehrabadi2؛ Mohsen Hoseini3؛ Elahe Shahryari4
1Assistant Professor. Department of Biochemistery, Faculty of Veterinary, Semnan University, Semnan, Iran.
2Department of Poultry Science, Faculty of Agriculture, Technical and Vocational University of Pakdasht, Tehran, Iran.
3Graduated PhD Animal Science, Faculty of Agriculture, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran.
4Graduated MSc Animal Science, Faculty of Agriculture, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran.
چکیده [English]
Scrapie is a neuromuscular neuronal disease that is caused by unusual protein pricking in the brain that causes the protein to become resistant. Immunological and genetic factors have been mentioned as the main causes of this scrapie. Among these genetic factors that may contribute to the development or progression of the disease, is the polymorphism at codon 171 of the protein of the prion gene. In this study, we investigated the polymorphism of Prion protein (PrP) gene (code 171) in the Sangsari sheep breed. In total 150 blood samples were taken from sheep in Damghan genetic modification center, using venojects treated with the anti-clot substance (EDTA). Then their DNAs were extracted by usage salting out procedure Extracted DNAs were treated quantitatively and qualitatively (using a spectrophotometer and gel agarose 0/8% repetitively), then the required amounts for each polymerase chain reaction (PCR) were specified. In the polymerase chain reactions, using the relevant primer, the related part was reproduced and then was cut by using Sau3AI enzymes 171 target site. Individual genotype was identified by using electrophoresis on agarose gel. Results showed that the frequency of R/R, R/Q and Q/Q genotypes was 87, 8 and 5%, respectively. The revealed results for the frequency of the desired alleles were Q and R, respectively, 10 and 90%. Genotypes of Q/Q were the most susceptible and R/R and R/Q genotypes were resistant to scrapie disease.