| تعداد نشریات | 285 |
| تعداد نشریات سازمان | 83 |
| تعداد شماره‌ها | 3,084 |
| تعداد مقالات | 34,409 |
| تعداد مشاهده مقاله | 48,539,249 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 79,132,655 |
Cloning and Expression of Com1 and OmpH Genes of Coxiella burnetii in Periplasmic Compartment of Escherichia coli with the Aim of Recombinant Subunit Vaccine Production | ||
| Archives of Razi Institute | ||
| مقاله 3، دوره 74، شماره 4، اسفند 2019، صفحه 341-347 اصل مقاله (277.28 K) | ||
| نوع مقاله: Original Articles | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.22092/ari.2018.122911.1233 | ||
| نویسندگان | ||
| H. Bakhteyari1؛ R. Jahangiri1؛ N. Nazifi2؛ A. Kakanezhadifard1؛ Z. Soleimani1؛ Ali Forouharmehr3؛ S. Azadi Chegeni1؛ A. Jaydari* 1 | ||
| 1Department of pathobiology, Faculty of Veterinary Medicine, Lorestan University, Khorramabad, Iran | ||
| 2Department of Animal Science, Faculty of Agriculture, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran | ||
| 3Department of Animal Science, Faculty of Agriculture, Lorestan University, Khorramabad, Iran | ||
| چکیده | ||
| Coxiella burnetiiis an obligate and gram-negative bacteria causing query fever (Q fever) disease, despite the importance of Q fever, there is no universal vaccine against this disease. Therefore, application of the recombinant subunit vaccines which use Com1 and OmpH as immunogenic proteins can be useful in this regard. To perform the current project, Com1 and OmpH genes were amplified by polymerase chain reaction (PCR) method, then, the PCR products were purified by DNA precipitation technique. In order to clone, first, both genes along with the pET-22b(+) vector were digested by NcoI and XhoI enzymes and then, Com1 and OmpH genes were ligated in linear vectors by T4 DNA ligase. The recombinant vectors were transformed in BL21 (DE3) strain of Escherichia coli and expression was induced by 1 mM Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside. Expression of Com1 and OmpH was investigated using 12% Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. Finally, both proteins were purified by Ni-NTA columns and consequently confirmed by western blotting. The results of assessing 1% agarose gel showed that PCR amplification, DNA precipitation, and digestion of both genes were successfully performed.Theresults of colony PCRs and sequencing revealed that Com1 and OmpH were correctly cloned in pET-22b(+) vector. Finally, the results of expression, purification, and western blotting of both proteins showed thatBL21 (DE3) strain of Escherichia colicould be able to express Com1 and OmpH proteins. Based on the collected data, it seems that Escherichia coli as an affordable and simple host can be applied to express Com1 and OmpH genes. It should be mentioned that products of the present project can be examined as recombinant subunit vaccines against Q fever. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| Coxiella burnetii؛ Com1؛ OmpH؛ E.coli؛ subunit vaccine | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| همسانه سازی و بیان ژنهای Com1 و OmpH از باکتری کوکسیلا بورنتی در فضای پری پلاسمیک اشرشیا کلی با هدف تولید واکسن زیرواحدی | ||
| چکیده [English] | ||
| کوکسیلا بورنتی یک باکتری گرم منفی است که سبب بروز بیماری تب کیو میگردد. علی رغم اهمیت بیماری تب کیو، واکسن جهانی برای مقابله با این بیماری وجود ندارد. بنابراین بکارگیری واکسن‌های زیرواحدی که از پروتئین‌های ایمنوژنیک Com1 و OmpH استفاده می‌کنند میتواند سودمند باشد. برای انجام این پژوهش ژنهای Com1 و OmpH با استفاده از روش واکنش زنجیرهای پلیمراز تکثیر شد، سپس محصولات روش واکنش زنجیرهای پلیمراز با استفاده از تکنیک نشست DNA خالصسازی گردید. به منظور همسانه سازی، در ابتدا هر دو ژن به همراه وکتور pET-22b(+) با استفاده از دو آنزیم NcoI و XhoI هضم گردیدند و سپس دو ژن Com1 و OmpH با استفاده از آنزیم T4 لیگاز درون وکتور خطی الحاق گردیدند. وکتورهای نوترکیب به سویه BL21(DE3) از باکتری اشرشیا کلی ترنسفرم گریدند و بیان با استفاده 1 میلی مولار IPTG القاء گردید. بیان Com1 و OmpH با استفاده از SDS-PAGE 12 درصد مورد بررسی قرار گرفت. در نهایت هر دو پروتئین با استفاده از ستون‌های Ni-NTA خالصسازی شدند و با وسترن بلات مورد تایید قرار گرفتند. بررسی نتایج بر روی ژل اگاروز یک درصد نشان داد، تکثیر، نشست DNA و هضم آنزیمی به موفقیت صورت گرفته است. نتایج کلونی روش واکنش زنجیرهای پلیمراز و توالییابی نیز نشان داد که هر دو ژن به درستی درون وکتور الحاق شدهاند. نتایح بیان، خالصسازی و وسترن بلات نیز نشان داد سویه BL21(DE3)از اشرشیا کلی توانسته است سبب بیان هر دو پروتئین گردد. با توجه به نتایج این تحقیق به نظر می رسد، اشرشیا کلی به عنوان یک سیستم بیانی ساده و ارزان قیمت میتواند برای بیان ژنهای Com1 و OmpHبه کار گرفته شود. باید خاطر نشان کرد، محصولات این تحقیق میتواند به عنوان واکسن‌های زیرواحدی در مقابل تب کیو مورد آزمایش قرار گیرد. | ||
| کلیدواژه‌ها [English] | ||
| کوکسیلا بورنتی, Com1, OmpH, اشرشیا کلی, واکسن زیرواحدی | ||
| مراجع | ||
|
Anderson, A., Bijlmer, H., Fournier, P.-E., Graves, S., Hartzell, J., Kersh, G.J., et al., 2013. Diagnosis and management of Q fever—United States, 2013: recommendations from CDC and the Q Fever Working Group. Morb Mortal Wkly Rep 62, 1-29.
Derrick, E., 1937. "Q" Fever, a New Fever Entity: Clinical Features, Diagnosis and Laboratory Investigation. Med J Aust 2, 281-299.
Eldin, C., Mélenotte, C., Mediannikov, O., Ghigo, E., Million, M., Edouard, S., et al., 2017. From Q fever to Coxiella burnetii infection: a paradigm change. Clin Microbiol Rev 30, 115-190.
Forouharmehr, A., Nassiri, M., Ghovvati, S., Javadmanesh, A., 2018. Evaluation of different signal peptides for secretory production of recombinant bovine pancreatic ribonuclease A in Gram negative bacterial system: an in silico study. Curr Proteomics 15, 24-33.
Ghafari, F., Kheirandish, F., Kazemi, B., Ghafari, M.D., Bandehpour, M., 2013. Expression of recombinant human serum albumin in E.coli (BL21). New Cell Mol Biotech J 3, 61-66.
Glazunova, O., Roux, V., Freylikman, O., Sekeyova, Z., Fournous, G., Tyczka, J., et al., 2005. Coxiella burnetii genotyping. Emerg Infect Dis 11, 1211-1217.
Hansson, M., Sta, S., 2000. Design and production of recombinant subunit vaccines. Biotechnol Appl Biochem 32, 95-107.
Hendrix, L., Samuel, J., Mallavia, L., 1990. Identification and cloning of a 27‐kDa Coxiella burnetii immunoreactive protein. Ann NY Acad Sci 590, 534-540.
Jahandar, M.H., Forouharmehr, A., 2019. Optimization of Human Serum Albumin Periplasmic Localization in Escherichia coli Using In Silico Evaluation of Different Signal Peptides. Int J Pept Res Ther 25, 635-643.
Kristensen, K., Gyhrs, A., Lausen, B., Barington, T., Heilmann, C., 1996. Antibody response to Haemophilus influenzae type b capsular polysaccharide conjugated to tetanus toxoid in preterm infants. Pediatr Infect Dis J 15, 525-529.
Lo, R.Y., 1987. The development of subunit and synthetic vaccines using recombinant DNA technology. Biotechnol Adv 5, 235-256.
Nazifi, N., Tahmoorespur, M., Sekhavati, M.H., Haghparast Mohammad, A., Behroozikhah A., 2018. Engineering, Cloning and Expression of DNA Sequence Coding of OMP31 Epitope of Brucella melitensis linked to IL-2 in Escherichia coli. Int J Infect 5, e68974.
Parker, N.R., Barralet, J.H., Bell, A.M., 2006. Q fever. Lancet 367, 679-688.
Seshadri, R., Paulsen, I.T., Eisen, J.A., Read, T.D., Nelson, K.E., Nelson, W.C., et al., 2003. Complete genome sequence of the Q-fever pathogen Coxiella burnetii. Proc Natl Acad Sci 100, 5455-5460.
Soler, E., Houdebine, L.M., 2007. Preparation of recombinant vaccines. Biotechnol Ann Rev 13, 65-94.
Xiong, X., Wang, X., Wen, B., Graves, S., Stenos, J., 2012. Potential serodiagnostic markers for Q fever identified in Coxiella burnetii by immunoproteomic and protein microarray approaches. BMC Microbiol 12, 35. | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 14,859 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 55,503 |
||