| تعداد نشریات | 285 |
| تعداد نشریات سازمان | 83 |
| تعداد شماره‌ها | 3,085 |
| تعداد مقالات | 34,431 |
| تعداد مشاهده مقاله | 48,765,078 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 79,276,123 |
Cloning of Clostridium perfringens Iota Toxin Gene in Escherichia coli | ||
| Archives of Razi Institute | ||
| مقاله 4، دوره 73، شماره 2، شهریور 2018، صفحه 107-111 اصل مقاله (3.15 M) | ||
| نوع مقاله: Original Articles | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.22092/ari.2018.116618 | ||
| نویسندگان | ||
| P. Seyed Sayyah1؛ B. Golestani Eimani* 2؛ R. Pilehchian Langroudi3 | ||
| 1Department of Biology, Islamic Azad University, Urmia branch, Urmia, Iran | ||
| 2Department of Biology, Islamic Azad University,Urmia branch, Urmia, Iran | ||
| 3Specialized Clostridia reseach laboratory, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Alborz, Karaj, Iran. | ||
| چکیده | ||
| Iota toxin is produced by Clostridium perfringens type E. This toxin causes antibiotic-associated enterotoxemia in lambs and calves. Iota toxin is a binary toxin that has two components including Ia (the enzyme component) and Ib (the binding component). Ib binds to the surface receptor of target cells and translocate Ia into the cytosol of cells. The aim of this study was to clone toxigenic epitope of iota a gene in E. coli strain Top10. In this study, the phenol–chloroform method was used for the extraction of the whole genomic DNA. The toxigenic epitope of iota a gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR). The PCR product was ligated into the pTZ57R/T vector cloning site. Then, based on the TA-cloning method, the product was cloned in competent E. coli strain Top10. Colony PCR was used to screen bacterial colonies transformed with recombinant plasmids. The presence of 446-bp fragment on agarose gel showed that the toxigenic epitope of iota a gene of C. perfringens has been cloned in E. coli strain Top10. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| Cloning؛ Clostridium perfringens؛ Iota toxin؛ E. coli؛ TA-cloning | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| کلونینگ ژن یوتای کلستریدیوم پرفرینجنز در باکتری اشرشیا کلی | ||
| نویسندگان [English] | ||
| پونه سید سیاح1؛ بهرام گلستانی ایمانی2؛ رضا پیله چیان لنگرودی3 | ||
| 1دانشگاه آزاد اسلامی واحد ارومیه- گروه زیست شناسی- ارومیه- ایران | ||
| 2دانشگاه آزد اسلامی واحد ارومیه- گروه زیست شناسی | ||
| 3انستیتو تحقیقات واکسن وسرم سازی رازی- کرج - ایران | ||
| چکیده [English] | ||
| توکسین یوتا به وسیله باکتری کلستریدیوم پرفرینچنز تیپ E تولید می شود. این توکسین باعث بروز انتروتوکسمی وابسته به آنتی بیوتیک در بره و گوساله میشود. توکسین یوتا گروه یک توکسین دوتایی است که متشکل از دو پلی پپتید مستقل است که شامل توکسین Ia (جزء آنزیمی) و Ib (جزء متصل شونده) می باشد. Ib به گیرنده سطح سلولی سلولهای هدف متصل شده و Ia را به درون سیتوزول سلولها منتقل می کند. هدف از انجام این مطالعه کلونینگ بخش اپیتوپ توکسی ژنیک ژن یوتای a (iap) در اشریشیا کلی سویه Top10 بود. دراین تحقیق کل DNA ژنومی توسط روش فنل- کلروفرم استخراج شد. بخش اپیتوپ توکسی ژنیک ژن iap به روش واکنش زنجیرهای پلیمراز به وسیله یک جفت پرایمر اختصاصی از DNA استخراج شده جدا و تکثیر یافت. محصول روش واکنش زنجیرهای پلیمراز به حامل pTZ57R/T متصل شده و بر اساس روش TA- کلونینگ، درون باکتری اشریشیا کلی مستعد شده Top10 کلون شد. کلنیهای باکتری ترانسفورم شده با پلاسمید نوترکیب به وسیله روش colony PCR شناسایی شد. نتیجه بخش اپیتوپ توکسی ژنیک ژن یوتای آلفای کلستریدیوم پرفرینجنز کلون شده با طول 446 جفت باز را نشان داد. | ||
| کلیدواژه‌ها [English] | ||
| کلونینگ, کلستریدیوم پرفرینجنز, توکسین یوتا, TA-کلونینگ | ||
| مراجع | ||
|
Aktories, K.; Wegner, A., 1989.ADP-ribosylation of actin by clostridial toxins. J Cell Biol 109, 1385–1387.
Aziminia, P., Pilehchian-Langroudi, R., Esmaeilnia, K., 2016. Cloning and expression of Clostridium perfringens type D vaccine strain epsilon toxin gene in E. coli as a recombinant vaccine candidate. Iranian J Microbiol 8, 226-231.
Bakhshi, F., Pilehchian-Langroudi, R., Golestani, Eimani, B., 2016. Enhanced expression of recombinant beta toxin of Clostridium perfringens type B using a commercially available Escherichia coli strain. Onderstepoort J Vet Res 30; 83(1):a1136.
Barth, H., Aktories, K., Popoff, M.R., Stiles, B.G., 2004. Binary bacterial toxins: Biochemistry, biology, and applications of common Clostridium and Bacillus proteins. Microbiol. Mol Biol Rev 68, 373–402.
Barth, H., K. Aktories, M. R. Popoff, and B. G. Stiles. 2004. Binary bacterial toxins: biochemistry, biology, and applications of common Clostridium and Bacillus proteins. Microbiol. Mol Biol Rev 68:373–402.
Blöcker, D., Behlke, J., Aktories, K., Barth, H., 2001. Cellular uptake of the Clostridium perfringens binary iota-toxin. Infect Immun 69(5):2980-7.
Brynestad, S., Synstad, B., Granum, P.E., 1997.Th e Clostridiumperfringensenterotoxin gene is on a transposable element in type A human food poisoning strains. Microbiology 143: 2109-2115.
Czeczulin, J.R., Collie, R.E., McClane, B.A., 1996. Regulated expression of Clostridium perfringens enterotoxin in naturally cpe-negative type A, B, and C isolates of C. perfringens. Infec Immun 64: 3301-3309.
Hale, M. L., J. C. Marvaud, M. R. Popoff, and B. G. Stiles. 2004. Detergentresistant membrane microdomains facilitate Ib oligomer formation and biological activity of Clostridium perfringens iota-toxin. Infect Immun 72: 2186–2193.
McDonel, J.L., 1986. Pharmacology of Bacterial Toxins; Pergamon Press: New York, NY, USA, pp. 477–517.
Ming-Yi Zhou and Celso E. Gomez-Sanchez., 2000.Universal TA Cloning.Curr. Mol Biol 2(1): 1-7.
Nagahama, M., Umezaki, M., Oda, M., Kobayashi, K., Tone, S, Suda, T., Ishidoh, K., Sakurai, J., 2011. Clostridium perfringens iota-toxin binducesrapidcellnecrosis. Infect Immun 79(11):4353-60.
Nijland R, Lindner C, Hartskamp M, Hamoen L, Kuipers OP., 2007 Heterologous production and secretion of Clostridium perfringens β-toxoid in closelyrelated Gram-positive hosts. J Biotechnol 127:361-372.
Perelle S, Scalzo S, Kochi S, Mock M, Popoff MR., 1997. Immunological and functional comparison between Clostridium perfringens iota toxin, C. spiroforme toxin, and anthrax toxins. FEMS Microbiol Lett 146(1):117-21.
Petit, L., Gibert, M., Popoff, M.R., 1999. Clostridium perfringens: toxinotype and genotype. Trends. Microbiol 7: 104-110.
PilehchianLangroudi R, Shamsara M, Aghaiypour K., 2013. Expression of Clostridium perfringens epsilon-beta fusion toxin gene in E. coli and its immunologic studies in mouse.Vaccine 11; 31 (32):3295-9.
PilehchianLangroudi R., 2015. Isolation, Specification, Molecular Biology Assessment and Vaccine Development of Clostridium in Iran: A Review. Int J Enteric Pathog 3(4): e28979.
Sakurai J, Nagahama M, Oda M, Tsuge H, Kobayashi K., 2009. Clostridium perfringens iota-toxin: structure and function. Toxins (Basel) 1(2):208-28.
Sakurai, J., Nagahama. M., Ochi, S., 1997.Major toxins of Clostridium perfringens. J Toxicol Toxin Rev 16, 195–214.
Stiles BG, Hale ML, Marvaud JC, Popoff MR., 2002. Clostridium perfringens iotatoxin: characterization of the cell-associatediotab complex. Biochem J 367(Pt 3):801-8.
Vandekerckhove J, Schering B, Bärmann M, Aktories K., 1987. Clostridium perfringens iota toxin ADP-ribosylates skeletal muscle actin in Arg-177.FEBS Lett 225(1-2):48-52.
Hadjeb, N. and Berkowitz, G.A., 1996. Preparation of T-overhang vectors with high PCR product cloning efficiency. BioTechniques 20: 20-22.
Rashtchian, A., 1995. Novel methods for cloning and engineering genes using the polymerase chain reaction. Curr Opin Biotech 6: 30-36. | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 2,369 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 3,405 |
||