اخبار و اعلانات

 آمار

تعداد نشریات283
تعداد نشریات سازمان81
تعداد شماره‌ها2,729
تعداد مقالات31,077
تعداد مشاهده مقاله28,766,965
تعداد دریافت فایل اصل مقاله16,316,754
Esmaelizad, M., Jafari, S., Rafiei, Alireza. (1394). Absolute quantification of murine interleukine-4, interleukine- 10 and interferon-γ gene transcripts using Real Time PCR. سامانه مدیریت نشریات علمی, 70(2), 119-125. doi: 10.7508/ari.2015.02.007
M. Esmaelizad; S. Jafari; Alireza Rafiei. "Absolute quantification of murine interleukine-4, interleukine- 10 and interferon-γ gene transcripts using Real Time PCR". سامانه مدیریت نشریات علمی, 70, 2, 1394, 119-125. doi: 10.7508/ari.2015.02.007
Esmaelizad, M., Jafari, S., Rafiei, Alireza. (1394). 'Absolute quantification of murine interleukine-4, interleukine- 10 and interferon-γ gene transcripts using Real Time PCR', سامانه مدیریت نشریات علمی, 70(2), pp. 119-125. doi: 10.7508/ari.2015.02.007
Esmaelizad, M., Jafari, S., Rafiei, Alireza. Absolute quantification of murine interleukine-4, interleukine- 10 and interferon-γ gene transcripts using Real Time PCR. سامانه مدیریت نشریات علمی, 1394; 70(2): 119-125. doi: 10.7508/ari.2015.02.007

Absolute quantification of murine interleukine-4, interleukine- 10 and interferon-γ gene transcripts using Real Time PCR

Archives of Razi Institute
مقاله 7، دوره 70، شماره 2، مهر 2015، صفحه 119-125    اصل مقاله (257.23 K)
شناسه دیجیتال (DOI): 10.7508/ari.2015.02.007
نویسندگان
M. Esmaelizad* 1؛ S. Jafari2؛ Alireza Rafiei3
1Central Laboratory Department, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran
2Central Laboratory Department, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran Molecular Cell Biology Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran
3Molecular Cell Biology Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran
چکیده
The study of cytokines gene expression is quite important in various conditions of health and disease for the
evaluation of clinical responses to new vaccination approaches. An absolute quantification is based on a
calibration curve and production of standard controls to achieve more reliable results than in relative
system. In this study we attempted to construct standard controls to evaluate the murine immune response.
The number of 10 Balb/c mice immunized with hydatid cyst fluid subcutaneously with two week intervals
to induce transcription of Th1 and Th2 related cytokines. Three Pairs of primers were designed to
amplification of interleukine-4, interleukine-10 and interferon-γ by Oligo software. Partial sequences of
three cytokine genes were cloned into pTZ57T vector. Three recombinant plasmids were purified and serial
dilutions were prepared. Real time qPCR carried out using SYBR-Green I fluorescence dye and standard
curves were provided by the 7500 ABI SDS software based on the exact concentration of dilutions and the
amplification plots. Results showed that this method was able to evaluate the cytokines mRNA levels less
than 0.01pg (~150 copy). We concluded that absolute real-time qPCR can be successfully applied to the
quantification of antigen-induced cytokines.
کلیدواژه‌ها
real time PCR؛ Cytokine؛ IL4؛ IL10؛ IFN؛ γ
عنوان مقاله [English]
کمیت سنجی مطلق رونویسی ژن اینترلوکین-4 ،اینترلوکین-10 واینترفرون- گامای موشی با روش Real Time PCR
نویسندگان [English]
مجید اسماعیل زاد1؛ شیوا جعفری2؛ علیرضا رفیعی3
1موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی
2موسسه تحقفیقات واکسن و سرم سازی رازی و دانشگاه علوم پزشکی ساری
3دانشگاه علوم پزشکی ساری
چکیده [English]
مطالعه ﺑﻴﺎﻥ سایتوکاینها ﺩﺭ ﺷﺮﺍﻳﻂ ﻣﺨﺘﻠﻒ ﺳـﻼﻣﺖ ﻭ ﺑﻴﻤــﺎﺭﻱ و برای ارزیابی پاسخهای ایمنی واکسنهای جدید بسیار مهم است. کمیت سنجی مطلق مبتنی بر رسم نمودار کالیبراسیون و تولید کنترل های استاندارد میباشد تا نتایج قابل اعتمادتری نسبت به سیستم های نسبی داشته باشد. در این مطالعه سه کنترل استاندارد برای سایتوکاینهای اینترلوکین 10، اینترلوکین4 و اینترفرون گاما به منظور انجام روش کمیت سنجی مطلق در مدل موشی ساخته شد. در این پژوهش تعداد 10 موش نژاد Balb/C با مایع کیست هیداتیک همراه با اجووان فروند بطور زیر جلدی سه بار با فاصله دو هفته به منظور القا سلولهایTh1، Th2ایمن شدند. سه جفت پرایمر اختصاصی جهت تکثیر اینترلوکین 4، اینترلوکین10 و اینترفرون گاما با استفاده از نرم افزار اولیگو طراحی شد. توالی های تکثیر شده از سه سایتوکاین دروکتور pTZ57R-T کلون شدند . پلاسمیدهای نوترکیب حاوی توالی های مورد نظر خالص شده و رقت های سریالی از آنها تهیه شد. واکنش Real time PCR در حضور سایبر گرین انجام شده نمودر استاندارد با نرم افزار7500 ABI SDS بر اساس غلظتهای سریال پلاسمیدهای نوترکیب ترسیم شد. نتایج این مطالعه نشان داد که این تست برای اندازه گیری میزان ترنسکریپشن سه سایتوکاین مورد مطالعه تا رقت کمتراز 0.01 پیکوگرم (حدودا 150 کپی) با راندمان بالا میتواند کارامد باشد. این تکنیک امکان بررسی کمی سایتوکاین های بیان شده بواسطه القا آنتی ژن را فراهم می کند.
کلیدواژه‌ها [English]
real time PCR, سیتوکین, IL4, IL10, IFN, γ
آمار
تعداد مشاهده مقاله: 1,309
تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 892


counter
سامانه مدیریت نشریات علمی. قدرت گرفته از سیناوب