| تعداد نشریات | 286 |
| تعداد نشریات سازمان | 84 |
| تعداد شماره‌ها | 2,871 |
| تعداد مقالات | 32,535 |
| تعداد مشاهده مقاله | 42,411,881 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 19,187,951 |
Molecular cloning of Clostridium septicum vaccine strain alpha toxin gene in E. coli | ||
| Archives of Razi Institute | ||
| مقاله 2، دوره 69، شماره 1، مرداد 2014، صفحه 15-20 اصل مقاله (329.66 K) | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.7508/ari.2014.01.002 | ||
| نویسندگان | ||
| A.R. Jabbari؛ S. Moradi Bidhendi؛ P. Khaki؛ R. Pilehchian Langroudi* ؛ Z. Bozorgkhoo؛ M. Moosawi Shoshtari | ||
| چکیده | ||
| Clostridium septicum a Gram positive anaerobic bacterium produces several toxins including alpha, beta, gamma and delta. C. septicum alpha toxin is lethal and is responsible for a serious disease known as gas gangrene. The aim of the present study was to molecular cloning and sequencing of C. septicum vaccine strain alpha toxin gene. Genomic DNA was extracted using standard phenol and chloroform extraction method, and the target gene was amplified through PCR by specific primers. Quality and quantity of PCR product was evaluated using agarose gel electrophoresis and confirmed with spectrophotometry. The PCR product was purified and was ligated in pJET1.2blunt cloning vector and was used for E. coli/TOP10 competent cells transformation. pJETαsep recombinant plasmid was purified and sequenced using universal primers. Sequencing and BLAST analysis of csa showed over 99% identity to other previously deposited csa in the GenBank. The csa sequence was deposited in the GenBank under accession number JN793989. E. coli/TOP10/pJETαsep as a recombinant bacterium could be used for purifying of recombinant csa gene and its expression in the suitable prokaryotic hosts. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| Clostridium septicum؛ vaccine strain؛ alpha toxin gene (csa)؛ Cloning؛ Sequencing | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| کلونینگ ملکولی ژن آلفا توکسین کلستریدیوم سپتیکوم سویه واکسن در اشریشیا کلی | ||
| نویسندگان [English] | ||
| احمد رضا جباری؛ سهیلا مرادی بیدهندی؛ پژواک خاکی؛ رضا پیله چیان لنگرودی؛ زهرا بزرگخو؛ محسن موسوی شوشتری | ||
| چکیده [English] | ||
| کلستریدیوم سپتیکوم یک باکتری گرم مثبت بی هوازی است که تعدادی توکسین از جمله آلفا، بتا، گاما و دلتا را تولید می کند. آلفا توکسین کلستریدیوم سپتیکوم کشنده بوده و مسئول بیماری بسیار خطرناک قانقرایای گازی است. هدف مطالعه حاضر کلونینگ ملکولی و توالی یابی ژن آلفا توکسین کلستریدیوم سپتیکوم سویه واکسینال(CN913) است. از سوسپانسیون کشت شبانه باکتری، DNA ژنومیک به وسیله روش استاندارد فنل کلروفرم تخلیص و ژن آلفا توکسین با استفاده از پرایمرهای اختصاصی طراحی شده و به روش واکنش زنجیره ای پلیمراز تکثیر شد. کمّیت و کیفیت محصول واکنش زنجیره ای پلیمراز با استفاده از الکتروفورز ژل آگارز تعیین و به روش اسپکتروفوتومتری تائید گردید. محصول واکنش زنجیره ای پلیمراز تخلیص ودر وکتورکلونینگ pJET1.2blunt لایگیت شد. سپس سلول مستعد E. coli/TOP10 به وسیله آن ترانسفورم گردید. پلاسمید نوترکیب pJETαsep از کلونE. coli/TOP10/pJETαsep تخلیص و ژن آلفا توکیسن به وسیلۀ پرایمرهای یونیورسال توالی یابی شد. توالی یابی و آنالیز بلاست ژن csa بیش از 99% تشابه را با سایر ژنهای csa موجود در بانک ژن نشان داد. این توالی با شماره JN793989 در بانک ژن ثبت گردید. از سویه E. coli/TOP10/pJETαsep می توان به عنوان یک کلون نوترکیب باکتریائی برای تخلیص ژن csa و بیان آن در میزبان مناسب استفاده نمود. | ||
| کلیدواژه‌ها [English] | ||
| کلستریدیوم سپتیکوم, سویه واکسن, ژن آلفا توکسین(csa), کلونینگ, توالی یابی | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 2,659 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 1,399 |
||