Mycoplasma Reference Laboratory, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran
چکیده
Detection of Mycoplasma synoviae (MS) by culture and polymerase chain reaction (PCR) has been reported from commercial chicken farms in different provinces of Iran. In some reports the phylogenetic analysis of MS isolates based on 16S rRNA and variable lipoprotein hemagglutinin (vlhA) genes have been carried out. The PCR product containing partial 16S rRNA genes of Iranain isolates was sequenced, and compared with 16S rRNA gene of MS sequences which were available in GenBank. Variations, polymorphisms, and differences between nucleotides of all isolates were observed. Phylogenetic analysis of these sequences showed that all MS isolates from Iran were most closely related to sequences of MS from Brazil. Sequence analysis of the N-terminal end of the hemagglutinin encoding gene vlhA were also used as an alternative for the detection and initial typing of field strains of MS in commercial poultry. The results showed that there was a complete concordance between all Iranian isolates nucleotide sequence and the 5́-vlhA region sequence remained unchanged in all MS isolates and demonstrated differentiation between Iranian isolates and live commercial MS-H vaccine strain. More recently, the single-copy domain of the conserved region of vlhA gene in MS was sequenced, analyzed and verified to type MS field isolates in Iran and live vaccine MS-H strain. In addition, a restriction fragment length polymorphism (RFLP) method was established based on single nucleotide polymorphism that existed in all field isolates of Iran to differentiate between these field isolates and MS-H. This PCR-RFLP method allowed differentiating all MS field isolates from the vaccine strain.
تعیین هویت مولکولی جدایه های مایکوپلاسما سینوویه از ماکیان تجاری ایران
نویسندگان [English]
سیدعلی پوربخش
آزمایشگاه رفرانس مایکوپلاسما، موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی
چکیده [English]
شناسایی مایکوپلاسما سینوویه با استفاده از روش های کشت و واکنش زنجیره ای پلیمراز از مزارع ماکیان تجاری استان های مختلف ایران گزارش شده است. آنالیز فیلوژنتیک جدایه های مایکوپلاسما سینوویه بر اساس ژن های 16S rRNA و هماگلوتینین (vlhA)، طی مطالعاتی بررسی گردیده است. محصولات واکنش زنجیره ای پلیمراز مربوط به قطعات ژن 16S rRNA که از جدایه های ایران بدست آمده بودند، تعیین توالی گردید و سپس با قطعات مربوط به 16S rRNA موجود در بانک ژن مقایسه شدند. تغییرات، تنوع و تفاوت بین نوکلئوتید های همه جدایه ها مورد بررسی قرار گرفتند و مطالعه فیلوژنتیک نشان داد که توالی مایکوپلاسما سینویه های جدا شده از ایران بیشترین نزدیکی را با توالی های مایکوپلاسما سینوویه از کشور برزیل داشتند. همچنین بررسی توالی انتــــــهای N-terminal مربوط به ژن کد کننده vlhA به عنوان یک جایگزین برای ردیابی و تایپینگ اولیه سویه های فیلدی مایکوپلاسما سینوویه، در طیور صنعتی به کار برده شده است. مطابقت کاملی بین توالی همه جدایه های ایران و عدم تغییر در توالی ناحیه انتهای vlhA همه جدایه های مایکوپلاسما سینوویه مشاهده گردید و همچنین تمایز بین جدایه های ایران و سویه واکسینال MS-H نشان داده شد. اخیرا" یک ناحیه مربوط به قسمت محافظت شده ژن vlhA در مایکوپلاسما سینوویه به منظور تعیین تیپ مایکوپلاسمای فیلدی در ایران و تمایز سویه واکسن زنده MS-H، تعیین توالی و بررسی گردید. علاوه بر آن، یک روش RFLP بر مبنای پلی مورفیسم تک نوکلئوتیدی که در تمامی جدایه های فیلدی ایران وجود دارد و بین جدایه های فیلدی و سویه MS-H تمایز ایجاد می کند، راه اندازی شده است. این روش PCR-RFLP قادر به تفریق همه جدایه های فیلدی از سویه واکسینال بود.