Leptospirosis is an acute infectious, systemic and septisemic disease which had recent outbreaks in some parts of Iran especially in north provinces. Rapid detection is a critical step for treatment and control of this disease. In this research a PCR based method was evaluated for detection of Iranian local endemic serovars. All reported endemic serovars of Leptospira including Leptospira grippotyphosa, Leptospira canicola, Leptospira sejreo hardjo, Leptospira pomona and Leptospira icterohaemorrhagiae which at present are used for Leptospira micro agglutination test (LMAT) in Iran, were subjected to this PCR. Standard representative serovars from ATCC studied in parallel to local serovars. DNA extracted by phenol-chloroform-isoamyl alcohol precipitation. After optimization, the sensitivity of PCR was about 1 fg equal to DNA of 1 Leptospira. All studied serovars including non pathogenic L. biflexa produced the reported 285 bp fragment. Restriction analysis with MboI confirmed the PCR product accuracy. In case of L. biflexa the pattern was completely different from the pathogenic ones. None of near matching bacteria had product in this method. This system was able to detect the existence of Leptospira DNA in all of studied LMAT positive serums.
لپتوسپیروزیس یک عفونت حاد سیستمک و سپتیسمیک است که در سالیان اخیر در مناطقی از ایران بویژه استانهای شمالی شیوع داشته است. در این بیماری تشخیص سریع مرحله حیاتی برای درمان و کنترل بیماری است. در این تحقیق کارائی روشPCR برای تشخیص سرووارهای موجود در ایران بررسی شد. تمام سرووارهای پاتوژن گزارش شده چون لپتوسپیرا کانیکولا, لپتوسپیرا پومونا, لپتوسپیرا گریپوتیفوزا, لپتوسپیرا ایکتروهموراژیه و لپتوسپیرا سجروهارجو که هم اکنون برای تست آگلوتیناسیون میکروسکوپی لپتوسپیرا(LMAT) در ایران استفاده می شود, در این مطالعه بررسی شد. همچنین سویه های مرجع استاندارد از ATCC آمریکا تهیه و در کنار سایر سویه های موجود بررسی شد. DNAبروش رسوب با فنل-کلروفرم-ایزوآمیل الکل تهیه شد. بعد از بهینه سازی, حساسیت روش تا حد 1 فمتوگرم معادل DNA یک لپتوسپیرا بود. تمام سویه های لپتوسپیرای مورد مطالعه از جمله لپتوسپیرا بایفلکسا غیرپاتوژن قطعه 285 بازی مورد انتظار را تولید می نمودند. آنالیز با آنزیم محدود کننده Mbo I صحت قطعه را تأئید کرد. در مورد لپتوسپیرا بایفلکسا الگوی الکتروفورزPCR کاملاً متفاوت از سایرین بود. این سیستم PCR در هیچکدام از سایر باکتری های مورد مطالعه باندی ایجاد ننمود. وجود DNA لپتوسپیرا در تمام نمونه های سرم مثبت )با (LMAT با این روش نشان داده شد. در حالی که نمونه های سرم منفی باندی نشان نمیدادند.
کلیدواژهها [English]
لپتوسپیرا, واکنش زنجیره ای پلیمراز, تشخیص مولکولی, MAT and Leptospirosis