| تعداد نشریات | 284 |
| تعداد نشریات سازمان | 82 |
| تعداد شماره‌ها | 3,044 |
| تعداد مقالات | 34,047 |
| تعداد مشاهده مقاله | 46,439,361 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 77,507,059 |
مقایسه روش‌های مختلف استخراج DNA به منظور مطالعه مولکولی انگل‌های فاسیولا | ||
| تحقیقات دامپزشکی و فرآورده‌های بیولوژیک | ||
| شناسنامه علمی شماره، دوره 24، شماره 3، مهر 1390، صفحه 30-35 اصل مقاله (652.2 K) | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.22092/vj.2011.101091 | ||
| نویسندگان | ||
| محمود محامی اسکویی1؛ عبدالحسین دلیمی اصل* 2؛ مهدی فروزنده مقدم3؛ محمد باقر رکنی4 | ||
| 1دانشجوی دکترای تخصصی گروه انگل شناسی پزشکی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران | ||
| 2استاد گروه انگل شناسی پزشکی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران | ||
| 3دانشیار گروه بیوتکنولوژی پزشکی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران | ||
| 4دانشیار گروه انگل شناسی و قارچ شناسی پزشکی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران | ||
| چکیده | ||
| فاسیولوزیس یکی از مهم ترین بیماری های انگلی مشترک بین انسان و دام می باشد که به لحاظ مشکلات بهداشتی و خسارات اقتصادی فراوان، در مناطق مختلف دنیا مورد توجه قرار دارد. با توجه به شیوع فاسیولوزیس، انجام مطالعات مختلف از جمله مطالعات مولکولی بر روی انگل های فاسیولا دارای اهمیت فراوانی است. هدف از این تحقیق دستیابی به روش مناسب استخراج DNA از انگل های فاسیولا به منظور انجام مطالعات مولکولی می باشد. پس از جمع آوری انگل های فاسیولا، پنج روش مختلف استخراج DNA شامل فنل کلروفرم، Chelex، CTAB، Ish-Horowicz و کیت مورد استفاده قرار گرفتند. به منظور ارزیابی روش های مذکور، کیفیت و کمیّت DNA حاصل از هر روش با توجه به OD، غلظت DNA و بازدهی PCR مورد بررسی قرار گرفتند. طبق نتایج حاصله در این مطالعه بیشترین غلظت DNA با استفاده از روش Ish-Horowicz، بهترین کیفیت DNA و بازدهی PCR با استفاده از کیت به دست آمد. روش های Chelex، CTAB و فنل کلروفرم در مقایسه با روش Ish-Horowicz کمترین غلظت DNA و نسبت به کیت کمترین کیفیت DNA و بازدهی PCR را داشتند. در اثر استفاده از روش Ish-Horowicz به لحاظ کمیت DNA بیشتری از انگل های فاسیولا در مقایسه با سایر روش ها حاصل می شود اما وقت گیر بودن روش، آلودگی و کیفیت پایین DNA و در نتیجه بازدهی پایین PCR می تواند از معایب این روش باشد. علی رغم اینکه مقدار DNA حاصله در اثر استفاده از کیت نسبت به روش Ish-Horowicz کمتر می باشد اما کیفیت بالای DNA، آلودگی پایین، سریع تر بودن و بازدهی مناسب تر PCR در استفاده از کیت نسبت به سایر روش ها از مزایای استفاده از کیت می باشد. | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| Comparison of different DNA extraction methods for molecular study of Fasciola parasites | ||
| نویسندگان [English] | ||
| M Mahami-Oskouei1؛ A Dalimi2؛ M Forouzandeh-Moghadam3؛ M.B Rokni4 | ||
| 1Department of Medical Parasitology, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran | ||
| 3Department of Medical Biotechnology, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran | ||
| 4Department of Medical Parasitology and Mycology, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran. | ||
| چکیده [English] | ||
| Fasciolosis is an important parasitic disease common among humans and livestock. It is considered as a health problem and causes great economic losses in several regions of the world. Considering the prevalence of fascioliasis, study on molecular aspect of the parasite is so much important. The present study was carried out to achieve a suitable method of DNA extraction from Fasciola for further molecular study.After collection of Fasciola, five different DNA extraction methods, including phenol chloroform, Chelex, CTAB, Ish-Horowicz and kit were evaluated. In this evaluation, the quality and quantity of DNA obtained from each method considering OD, DNA concentration and PCR efficiency were investigated. The results indicated that, the highest concentration of DNA, and efficiency of PCR were obtained by using Ish-Horowicz, and the kit respectively. Chelex, CTAB and phenol chloroform methods in comparison with Ish-Horowicz had lower concentration of DNA and the lower PCR efficiency.The method of Ish-Horowicz showed higher DNA quantity in comparison with other methods. But in term of time consuming, DNA contamination and quality and efficiency of PCR is not so favorite method. | ||
| مراجع | ||
|
1- Asmar, M, Milani A, Amirkhani A, Yadegarynia D. (1991) Seroepidemiological investigation of fascioliasis in Iran. Med. J. of IR of Iran, (1-2): 23-7.##
2- Berthomieu P and Meyer C. (1991) Direct amplification of plant genomic DNA from leaf and root pieces using PCR. Plant Mol Biol, 17: 555–7.##
3- Boray J.C. (1982) Fascioliasis. In: Handbook series in Zoonoses. Section C. Parasitic Zoonoses. Volume III (G.V. Hillyer and C.E. Hopla Edit.) CRC Press, Boca Raton-Florida; 71-88.##
4- Edvinsson B, Jalal S, Nord CE, Pedersen BS, Evengard B; (2004) ECSMID Study Group on Toxoplasmosis. DNA extraction and PCR assays for detection of Toxoplasma gondii. APMIS; 112(6):342-8.##
5-Farag H.F. (1998) Human fascioliasis in some countries of the Eastern Mediterranean Region.East Mediterr Health J; 4(1):156-60.##
6- Guyot K, Follet-Dumoulin A, Lelièvre E, Sarfati C, Rabodonirina M, Nevez G, Cailliez JC, Camus D, Dei-Cas E. (2001) Molecular characterization of Cryptosporidium isolates obtained from humans in France. J Clin Microbiol; 39(10):3472-80.##
7- Hosseini H, Jolokhani M, Bahonar A, Eslami A. (2010) Cattle fascioliasis in Gilan province, Iran. Int J of Vet Res.; 4(1).##
8- Jeanpierre, M. (1987) A rapid method for the purification of DNA from blood. Nucleic Acid. Research; 15(22): 9611.##
9- Kelly, J. M. (1993) Isolation of DNA and RNA from Leishmania. In: Hyde, J. E. (ed.), Protocols in Molecular Parasitology;Vol. 21. Humana Press, Totoa, NJ. PP: 123-31.##
10- Luton K, Walker D, Blair D. (1992) Comparisons of ribosomal internal transcribed spacers from two congeneric species of flukes (Platyhelminthes: Trematoda: Digenea). Mol Biochem Parasitol; 56:323–7.##
11- Mahittikorn A, Wickert H, Sukthana Y. (2005) Comparison of five DNA extraction methods and optimization of a b1 gene nested PCR (nPCR) for detection of Toxoplasma gondii tissue cyst in mouse brain. Southeast Asian J Trop Med Public Health; 36(6):1377-82.##
12- Mas-Coma S, Bargues MD, Valero MA. (2005) Fasciolosis and other plant-borne trematode zoonoses. Int J Parasitol; 35:1255-78.##
13- Mas-Coma S, Bargues M.D. (1999) Human fascioliasis. In: Dalton J(editor), fascioliasis. Dublin city, CAB International; P:411-33.##
14- Rassi Y, Sofizadeh A, Abai MR, Oshaghi MA, Rafizadeh S, Mohebail M, Mohtarami F, Salahi R. (2008) Molecular Detection of Leishmania major in the Vectors and Reservoir Hosts of Cutaneous Leishmaniasis in Kalaleh District, Golestan Province, Iran. Iranian J Arthropod-Borne Dis; 2(2): 21-7##
15- Ready PD, Lainson R, Shaw JJ, Souza AA. (1991) DNA probes for distinguishing Psychodopygus wellcomei from Psycho-dopygus complexus (Diptera: Psychodi-dae). Mem Inst Oswaldo Cruz; 86: 41-9.##
16- Salahi-Moghaddam A. (2004) Study of Human Fascioliasis and its intermediate host in Mazandaran Province. Ph.D. Thesis, School of Public Health, Tehran, TehranUniversity of Medical Sciences, [In Persian].##
17- Sharbatkhori M, KiaEB, Fasihi Harandi M, Jalalizand N, Zahabiun F, Mirhendi H. (2009) Comparison of five simple methods for DNA extraction from Echinococcus granulosus protoscoleces for PCR-Amplification of ribosomal DNA. Iranian J Parasitol; 4(2):54-60.##
18- Smith K, Diggle MA, Clarke SC. (2003) Comparison of commercial DNA extraction kits for extraction of bacterial genomic DNA from whole-blood samples. J Clin Microbiol; 41(6):2440-3.##
19- World Health Organization. (1995) Control of Food-borne Trematode Infections. Technical Report Series No.849; Geneva: WHO.##
20- Yera H, Filisetti D, Bastien P, Ancelle T, Thulliez P, Delhaes L. (2009) Multicenter comparative evaluation of five commercial methods for toxoplasma DNA extraction from amniotic fluid. J Clin Microbiol; 47(12):3881-6.## | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 3,075 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 2,999 |
||